荆芥探针法PCR鉴定试剂盒

荆芥探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品特点

高特异性：引物与探针针对荆芥保守序列设计，无交叉反应。

高灵敏度：检测下限达10~100拷贝/μL（或10ng基因组DNA）。

操作简便：预混试剂即开即用，支持快速上样电泳（含上样染料）。

防污染设计：提供阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照。

多重检测兼容：适配双重或三重PCR体系，支持高通量分析。

技术原理

采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术：

探针法：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。Taq酶切割探针后释放荧光信号，通过荧光强度变化定量靶序列。

扩增产物：预期片段长度560bp或其他特异性片段。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 荧光探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 模板稀释液 | 1mL |

操作步骤

标准曲线制备：将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL）。

RNA提取：自备样品RNA，建议使用柱式提取试剂盒。

反应体系配置（20μL）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板5μL。

PCR程序：

逆转录：50℃ 30分钟（若含RNA模板）；

预变性：94℃ 10分钟；

扩增：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（40循环，FAM通道采集信号）。

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、扩增需在独立区域进行，避免污染。

阳性对照需最后加入，且避免反复冻融。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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