使君子探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过检测扩增过程中荧光信号的增长（Ct值），实现对目标核酸的定性和定量分析。

产品特点

高灵敏度：可检测低至单拷贝的靶序列。

高特异性：引物及探针针对使君子高度保守区设计，避免交叉反应。

即开即用：含预混缓冲液、酶、引物探针混合物及阳性对照，仅需提供样品RNA模板。

质控保障：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，确保结果可靠性。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 用于标准曲线稀释 |

| 使君子探针法引物混合液 | 100μL | 特异性扩增引物 |

| 使君子qRT-PCR探针 | 50μL | 荧光标记探针 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 质控标准品 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），用于定量分析。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样品RNA，建议设置阴/阳性质控（NC/PC）。

3. qRT-PCR反应

反应体系（20μL）：

10μL缓冲液 + 2μL酶混合液 + 1μL探针 + 2μL引物混合液 + 5μL模板RNA。

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟 → 预变性：94℃ 10分钟 → 40循环（94℃ 15秒，60℃ 1分钟，采集FAM信号）。

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性：

阳性：Ct≤35，明显扩增曲线；

可疑：35<Ct<40，需复测；

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：避免气溶胶污染，建议在独立区域进行模板添加。

探针避光：防止荧光淬灭。

重复实验：可疑样本需复测确认。

仪器校准：确保荧光信号采集参数（如基线、阈值）设置正确。

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