首乌藤探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于首乌藤（Caulis polygoni multiflori）的特异性鉴定，适用于科研领域。试剂盒包含优化的引物和探针，具有高灵敏性、高特异性，支持定性和定量分析，可检测低至10 ng的DNA模板。

试剂盒组成

PCR预混液：含荧光探针、dNTPs、聚合酶及缓冲液。

引物探针混合液：针对首乌藤保守区设计，预期产物长度560 bp（莼试生物）或特异性扩增片段。

阳性对照：无传染性DNA片段（1×10^7拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

核酸释放剂（选配）：适用于免提取样本处理。

实验步骤

1. 样本处理

DNA提取：使用柱式提取法或试剂盒配套核酸释放剂，建议设置阴性/阳性对照（N+2样本）。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL）建立标准曲线。

2. PCR反应体系（20/40 μL）

| 成分 | 体积（20 μL体系） |

| PCR预混液 | 10 μL |

| 引物探针混合液 | 2 μL |

| DNA模板 | 8 μL |

3. 扩增程序

预变性：95℃ 5 min

循环（35次）：95℃ 15 sec → 57℃ 15 sec → 72℃ 40 sec

延伸：72℃ 10 min

4. 结果分析

定量检测：以标准曲线计算样品浓度（Ct值-log浓度线性关系）。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 36，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑（36<Ct<40）：需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，阴性对照无扩增、阳性对照Ct≤36方有效。

防污染措施：使用带芯吸头、紫外灯处理台面，实验后以10%次氯酸清洁。

适用范围：仅限科研，不适用于临床诊断。

常见问题解决

无扩增：检查RNA/DNA质量、抑制物残留或引物退火温度。

非特异性条带：优化Mg²⁺浓度或降低模板量。

弥散条带：减少循环次数或稀释模板。

公司正在出售的产品