丝瓜络探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于丝瓜络（Retinervus luffae fructus）的快速、高特异性鉴定。适用于科研领域，具备高灵敏度、低交叉反应性及稳定性，支持定性和定量分析。

产品特点

即开即用：用户仅需提供DNA/RNA模板，预混试剂含缓冲液、酶、引物及探针。

高特异性：引物与探针针对丝瓜络保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

灵敏度高：可检测低至10^2拷贝/μL的靶序列，线性范围覆盖5个数量级。

质量控制：提供无传染性阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，便于结果判读。

操作便捷：含上样染料，PCR产物可直接电泳；探针法减少非特异性信号干扰。

规格与成分

| 成分 | 规格 | 包装 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL | 黄盖管 |

| qPCR酶混合液 | 100 μL | 红盖管 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 黄盖管 |

| 引物混合液 | 100 μL | 白盖管 |

| 探针（FAM标记） | 50 μL | 棕色管 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | 黄盖管 |

| 核酸释放剂（试用装） | 20次 | 绿盖管 |

| 使用手册 | 1份 | — |

反应体系：20 μL/次，50次/盒。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温泡沫箱加冰密封运输，避免反复冻融。

实验步骤

1. 标准曲线制备（10^2–10^7拷贝/μL）

梯度稀释阳性对照，独立操作避免污染。

标记离心管（7–2号），依次加入45 μL稀释液及5 μL上一浓度标准品，涡旋混匀。

2. 样本处理

使用核酸释放剂或自提RNA，设置阴性（水）和阳性对照（10^4稀释液）。

3. PCR反应体系

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA | 5 |

| 超纯水 | 补至20 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） | |

数据分析

定量检测：以Ct值对标准曲线log浓度作图，计算样本拷贝数。

定性检测：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30；样本Ct≤36判为阳性。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，试剂完全溶解后离心混匀。

探针避光保存，反应液避免气泡。

实验后工作台需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

注：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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