酸枣仁探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒采用实时荧光定量PCR（探针法）技术，专用于酸枣仁（Semen ziziphi spinosae）源性成分的定性与定量检测。通过特异性引物及荧光标记探针，结合Taq酶的5'核酸外切酶活性，实现对目标DNA的高灵敏度、高特异性扩增与实时监测。适用于科研用途（不可用于临床诊断）。

检测原理

探针法设计：探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶切割探针，释放荧光信号，其强度与扩增产物量成正比。

实时定量：通过监测荧光信号增长（Ct值），结合标准曲线计算起始模板浓度。

产品特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。

高特异性：引物及探针针对酸枣仁保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，仅需提供样品DNA/RNA。

双功能应用：支持定性与定量分析，线性范围达5个数量级。

质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qPCR MasterMix | 500μL | 含缓冲液、dNTPs、酶 |

| 引物-探针混合液 | 100-150μL | 特异性扩增酸枣仁序列 |

| 阳性对照（1×10^7-8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |

| 模板稀释液 | 1mL | 样品及标准品稀释 |

| 超纯水 | 1mL | 阴性对照 |

操作步骤

标准曲线制备（以10^1-10^7拷贝/μL为例）

标记6管，依次加入45μL稀释液，梯度稀释阳性对照（5μL/步），得到6个浓度标准品。

冰上暂存，避免降解。

样品DNA/RNA提取

使用兼容的提取试剂盒纯化样本，建议设置阳性（PC）与阴性（NC）对照。

PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| MasterMix | 10 | 10 | 10 |

| 引物-探针混合液 | 2-3 | 2-3 | 2-3 |

| 模板DNA/RNA | 5-7 | - | - |

| 超纯水 | - | 5-7 | - |

| 标准品 | - | - | 5-7 |

PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（若需） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94-95℃ | 5-10 min |

| 扩增（40-45循环）| 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需混匀，短暂离心后使用。

本产品仅限科研，严禁用于临床诊断。

公司正在出售的产品