檀香探针法PCR鉴定试剂盒

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的增长（Ct值），实现对起始模板的定量或定性检测。

产品组成

| 成分 | 规格/体积 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 檀香特异性引物混合液 | 100μL |

| 檀香探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每个稀释步骤需更换枪头，避免交叉污染。

2. 样本RNA/DNA提取

建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。

兼容常规RNA提取试剂盒或柱式纯化法。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 样本模板 | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35（或36），扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct ≥ 40。

可疑结果（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及器材。

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