苦楝皮探针法PCR鉴定试剂盒

苦楝皮探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术开发，专用于苦楝皮（Cortex meliae）的定性与定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏度和特异性，可检测目标DNA或RNA模板，线性范围覆盖5个数量级，50次反应/盒。

产品组成

| 成分 | 规格/包装 | 保存条件 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL（黄盖） | -20℃避光 |

| 酶混合液 | 100 μL（红盖） | -20℃避光 |

| 荧光模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | -20℃ |

| 引物混合液 | 100 μL（白盖） | -20℃ |

| 探针（FAM标记） | 50 μL（棕色管） | -20℃避光 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） | -20℃单独存放 |

| 核酸释放剂（试用装）| 20次（1 mL，绿盖） | 室温或4℃ |

| 使用手册 | 1份 | - |

技术参数

检测方法：探针法荧光定量PCR（qPCR）

灵敏度：可检测低至10²拷贝/μL的目标序列。

特异性：引物针对苦楝皮高度保守区设计，无交叉反应。

适用样本：纯化后的DNA或RNA（需自备提取试剂）。

反应体系：20 μL/次，50次/盒。

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量检测需选）

按10倍梯度稀释阳性对照（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（7~2号），依次加入45 μL稀释液，逐级稀释并涡旋混匀。

2. 样本制备

提取待测样本核酸（推荐柱式法或试剂盒配套释放剂）。

设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释后标准品）。

3. qPCR反应

体系配制（20 μL/管）：

qPCR缓冲液 10 μL

酶混合液 2 μL

探针 1 μL

引物混合液 2 μL

模板 5 μL（样本/对照）

程序设置：

逆转录（RNA模板）：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40或无信号；

可疑：35 < Ct < 40，需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染措施：使用带滤芯枪头、专用工作服及一次性手套。

试剂保存：-20℃避光，使用前离心混匀，避免反复冻融。

实验后处理：工作台需用10%次氯酸或75%酒精消毒。

运输与储存

运输：泡沫箱加冰袋低温运输。

储存：-20℃保存，有效期12个月（阳性对照单独存放）。

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