昆布探针法PCR鉴定试剂盒

昆布探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过检测荧光强度实现靶序列定量分析。

三步流程：

反转录（若检测RNA）：将RNA模板转化为cDNA。

扩增：通过PCR循环扩增目标序列。

检测：实时监测荧光信号，生成扩增曲线。

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品RNA/DNA模板。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对昆布高度保守区设计，避免交叉反应。

双重用途：支持定性和定量检测（线性范围≥5个数量级）。

内置对照：提供阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，排除假阴性。

兼容性：适配多数RNA提取试剂盒。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 昆布qRT-PCR引物混合液 | 100μL |

| 昆布qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（6管），依次稀释阳性对照至10¹~10⁶拷贝/μL，避免交叉污染。

2. 样品制备

提取RNA（建议设置N+2样本，含阳性/阴性对照）。

3. qRT-PCR反应（20μL体系）

按比例加入缓冲液、酶混合液、探针、引物及模板，上机运行以下程序：

逆转录：50℃ 30分钟（若需）。

预变性：94℃ 10分钟。

扩增：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（40循环，FAM通道采集信号）。

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无信号。

灰区（36<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染：使用带滤芯枪头，定期清洁台面及移液器。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

用途限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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