荔枝核探针法PCR鉴定试剂盒

荔枝核探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针与靶序列结合时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

信号检测：扩增过程中荧光强度与产物量成正比，通过标准曲线定量分析起始模板浓度。

产品特点

高灵敏性：可检测低至几百拷贝/反应的模板。

高特异性：引物及探针针对荔枝核保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，用户仅需提供RNA模板。

内控设置：含阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，确保结果可靠性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 荔枝核引物混合液 | 100μL |

| 荔枝核探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作流程

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. 样本RNA提取

推荐使用柱式RNA提取试剂盒，提取后立即检测或-80℃保存。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 |

| qPCR缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探针 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| RNA模板 | 5μL |

4. 扩增程序

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：试剂准备区、样本处理区、扩增区需物理隔离，使用带滤芯吸头。

防污染：阳性对照最后加入，避免裸手接触反应管。

仪器设置：ABI系列仪器需关闭ROX校正，淬灭基团选择“None”。

废弃物处理：实验后需无害化处理。

声明

本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。

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