连翅探针法PCR鉴定试剂盒 新品

连翅探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，专用于连翅（Fructus forsythiae）的定性及定量鉴定。通过特异性引物和探针靶向目标基因保守区域，结合反转录（RT）和扩增步骤，实现对样本中目标核酸的高灵敏度检测。适用于科研、中药材鉴定及质量控制等领域。

检验原理

RNA提取：通过硅基质膜离心柱法或兼容的RNA提取试剂盒纯化样本RNA。

反转录：以RNA为模板，在反转录酶作用下合成cDNA。

荧光定量PCR：采用TaqMan探针法，通过35个扩增循环（变性-退火-延伸）放大目标片段，实时监测荧光信号，定量分析初始模板浓度。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（50T/盒） |

| RT-PCR反应液 | 750 μL ×1管 |

| 混合酶液 | 150 μL ×1管 |

| 阳性对照（灭活cDNA）| 40 μL ×1管 |

| 阴性对照（基因组DNA）| 40 μL ×1管 |

| 说明书 | 1份 |

储存条件与有效期

储存温度：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

自备仪器与试剂

仪器：荧光定量PCR仪、离心机、微量移液器、冰盒。

耗材：RNase-free枪头、离心管、PCR管。

其他试剂：RNA提取试剂盒（如QIAGEN或Roche）、DEPC水。

操作步骤

1. 样本处理

适用样本：植物组织、中药材粉末或提取的RNA。

保存要求：短期保存于2-8℃，长期需-80℃冻存，避免反复冻融。

2. RNA提取

按兼容的RNA提取试剂盒说明书操作，建议使用柱提法或免提核酸释放剂。

3. 标准曲线制备（定量检测适用）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），用于建立标准曲线。

4. PCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| RT-PCR反应液 | 15 μL |

| 混合酶液 | 3 μL |

| 模板RNA/cDNA | 2 μL |

5. 扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 反转录 | 50℃, 10 min| 1 |

| 预变性 | 94℃, 3 min | 1 |

| 扩增 | 94℃, 30 s | 35 |

| | 55℃, 30 s | |

| | 72℃, 30 s | |

| 最终延伸 | 72℃, 7 min | 1 |

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct值≤36，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

灰区（36<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

防污染：分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），使用一次性耗材。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

探针避光：反应液需避光保存，避免荧光淬灭。

生物安全：实验废弃物需经消毒处理（如10%次氯酸钠）。

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