葶苈子探针法PCR鉴定试剂盒

产品用途

科研用途，适用于葶苈子种源性基因的定性或定量检测。

检测原理

基于实时荧光定量PCR技术（探针法），通过5'核酸外切酶活性切割探针，释放报告基团荧光信号。探针5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光强度与靶序列含量成正比，实现高灵敏、高特异性检测。

产品组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL |

| 模板稀释液 | 1mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. RNA提取

自备样品RNA，建议设置阴性/阳性对照。

3. qRT-PCR反应

体系配置（20μL/反应）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物混合液2μL + 模板5μL。

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟 → 预变性：94℃ 10分钟 → 40循环（94℃ 15秒，60℃ 1分钟，采集FAM信号）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线明显；阴性：Ct≥40；灰区（35<Ct<40）需复测。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，反应液避光保存。

试剂使用前充分离心混匀，避免气泡。

阳性对照单独存放，严禁用于临床。

储存与运输

储存：-20℃避光保存。

运输：泡沫箱加冰密封。

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