王不留行探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于王不留行（Semen vaccariae）的快速、高灵敏度和高特异性核酸鉴定。适用于科研场景下的定性和定量分析，检测线性范围达5个数量级，兼容常规DNA提取方法。

规格与成分

试剂一：qPCR缓冲液（500 μL）

试剂二：qPCR酶混合液（50 μL）

试剂三：荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）

试剂四：PCR引物-探针干粉（50次反应）

试剂五：阳性对照（10^7拷贝/μL，50 μL）

包装：50次/盒（20 μL体系）

操作流程

标准曲线制备（10倍梯度稀释，6个浓度点）：

使用专用稀释液逐步稀释阳性对照，避免交叉污染。

稀释后冰上保存，需独立操作区域。

样品DNA制备：

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），PC为阳性对照1000倍稀释液。

兼容市售DNA提取试剂盒。

qPCR反应设置（20 μL体系）：

定量分析需设置标准曲线管（6管）、样品管（N+2）、阴性对照管（水为模板）。

反应程序：

逆转录：50℃ 10 min（如需）；

预变性：95℃ 10 min；

40循环：95℃ 15 sec → 60℃ 60 sec（采集FAM信号）。

数据分析：

定量：以Ct值对标准曲线log浓度回归计算样品浓度。

定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性，39-40间需复测。

注意事项

样本保存：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月），运输需2~8℃冰袋。

防污染措施：分区分步操作，使用带滤芯枪头，实验后消毒台面。

局限性：

结果受样本质量、提取效率及病原体变异影响；

试剂保存不当可能导致假阴性。

质量控制

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤39且扩增曲线典型，否则实验无效。

有效期与存储

有效期12个月，-20℃避光保存，避免反复冻融。

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