漏芦探针法PCR鉴定试剂盒 新品

漏芦探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于漏芦（Radix rhapontici）的快速、高特异性核酸鉴定。试剂盒包含预混优化的反应体系、引物探针组合及阳性对照，可实现定性或定量分析，灵敏度达10^1-10^6拷贝/μL，线性范围覆盖5个数量级。

试剂盒组成

PCR预混液（含热启动Taq酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液）

漏芦特异性引物及探针混合液（FAM标记）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL无传染性DNA片段）

荧光RT-PCR专用模板稀释液

核酸释放剂（试用装）（可选自备提取试剂）

超纯水（无核酸酶）

使用手册

实验流程

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10^6-10^1拷贝/μL），独立操作避免交叉污染。

每个稀释度需更换带滤芯枪头，冰上保存备用。

2. 样本处理

DNA提取：推荐使用柱式提取法或免提取核酸释放剂，设置阴性对照（水）和制备阳性对照（阳性对照1000倍稀释液）。

探针法qPCR反应：

反应体系：20μL（含预混液10μL、引物探针2μL、模板DNA 2μL、超纯水补足）。

循环条件：95℃ 5min预变性；95℃ 15s → 60℃ 1min，40循环（以仪器优化为准）。

3. 数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性检测：Ct≤36判为阳性，Ct≥40判为阴性；36<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行。

防污染措施：使用一次性耗材，实验台用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

质量控制：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤36且呈典型扩增曲线。

探针避光保存，避免反复冻融。

运输：低温泡沫箱加冰密封运输，避免反复冻融。

常见问题

假阴性：检查样本降解或抑制物干扰，建议重复提取。

非特异性扩增：确认引物探针特异性及操作污染。

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