芦根探针法PCR鉴定试剂盒 新品

芦根探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶切割探针，释放报告基团荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（FAM通道），实时计算Ct值，实现对目标序列的定性和定量检测。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 芦根特异性引物混合液 | 100μL |

| 芦根探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照依次稀释（10⁷~10²拷贝/μL），独立操作避免污染。

2. RNA提取

推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，或兼容的自选方法。设置阴/阳性对照（N+2）。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板 | 5 | - | - |

| 标准品稀释液 | - | - | 5 |

| 超纯水 | - | 5 | - |

4. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 40循环扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

结果分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性判断：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线明显。

可疑：35 < Ct < 40，需复测确认。

阴性：Ct ≥ 40或无Ct值。

注意事项

操作分区进行（试剂准备、样品处理、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

反复冻融不超过3次，避免试剂降解。

本产品仅限科研使用，严禁临床诊断。

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