路路通探针法PCR鉴定试剂盒

路路通探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，用于路路通核酸的特异性检测，适用于科研领域（如物种鉴定、基因表达分析），不用于临床诊断。

技术原理

探针法qPCR：针对路路通基因保守区域设计特异性引物及探针，通过荧光信号实时监测扩增过程，实现高灵敏度（低至50拷贝/反应）和特异性检测。

防污染设计：含阳性质控品（人工合成DNA片段）和阴性质控品，避免假阴性/假阳性干扰。

试剂盒组成

| 组分 | 规格（示例） | 功能说明 |

| qPCR反应缓冲液 | 500μL/管 | 提供扩增反应环境 |

| 酶混合液 | 100μL/管 | 含Taq DNA聚合酶等 |

| 引物-探针混合液 | 150μL/管 | 特异性扩增目标序列 |

| 阳性质控品 | 50μL（1×10^7拷贝/μL）| 验证实验有效性 |

| 阴性质控品 | 50μL/管 | 监控交叉污染 |

实验步骤

样本处理

样本类型：组织、血液、细菌等（需避免DNA/RNA直接提供，建议保存于液氮或Trizol液）。

核酸提取：推荐使用商品化提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。

反应体系配制

每反应需：19.5μL反应液 + 0.5μL扩增液 + 5μL模板DNA。

设置阴性/阳性对照。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 3min（1循环）；

扩增：95℃ 15sec → 55℃ 30sec（40循环，FAM通道采集信号）。

结果分析

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型；

阴性判定：无Ct值或Ct值＞38。

注意事项

操作规范：分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性质控，若对照异常则结果无效。

样本要求：避免反复冻融，长期保存需-70℃以下。

性能参数

特异性：经40余种近缘物种验证，无交叉反应；

灵敏度：最低检测限50拷贝/反应；

重现性：批内/批间变异系数＜5%。

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