罗汉果探针法PCR鉴定试剂盒

罗汉果探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过检测扩增过程中荧光信号的增长（Ct值），实现对目标RNA/DNA的定量或定性分析。

三步流程：

反转录（若检测RNA）：将RNA模板逆转录为cDNA。

扩增：PCR循环扩增目标序列。

检测：实时监测荧光信号。

产品组成

| 成分 | 规格/包装量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液| 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 罗汉果探针法引物混合液 | 100 μL |

| 罗汉果qRT-PCR探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（定量分析需6个稀释梯度）

使用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），冰上操作避免污染。

2. 样品RNA提取

推荐使用兼容的RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2样本）。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板/稀释液 | 5 | - | 5（对应梯度） |

| 超纯水 | - | 5 | - |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

PCR循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性：

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

阳性：Ct≤35且曲线呈指数增长。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测确认。

注意事项

操作需在独立洁净区域，避免交叉污染。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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