五倍子探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

五倍子探针法 PCR 鉴定试剂盒是基于TaqMan 探针法荧光定量 PCR技术，专为 ** 快速、特异、灵敏鉴定五倍子（Galla chinensis，基源为盐肤木Rhus chinensis）** 的分子检测试剂盒，仅限科研使用。

性能特点

高特异性：针对五倍子（Galla chinensis）保守序列设计探针及引物，无交叉反应。

高灵敏度：检测下限达10~100拷贝/反应。

操作便捷：预混PCR体系（含染料），只需加入模板DNA和引物即可进行扩增。

快速定量：支持探针法荧光定量PCR（qPCR），全程约3小时。

质量控制：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于结果分析及排除假阴性。

试剂盒组成

PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液（2×浓度）。

五倍子特异性引物及探针混合液：优化产物长度560 bp。

阳性对照：五倍子基因组DNA（需稀释使用）。

核酸释放剂：用于样本前处理。

超纯水：用于体系配制。

实验步骤

1. 样本制备

组织/细胞：匀浆后离心取上清，提取DNA（推荐柱式法）。

保存要求：短期4℃保存，长期需-20℃冻存，避免反复冻融。

2. PCR反应体系（40 μL）

| 成分 | 体积/用量 |

| 2× PCR预混液 | 20 μL |

| 引物探针混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 18 μL（10~100 ng）|

| 总体系 | 40 μL |

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 35 |

| | 57℃ | 15 sec | |

| | 72℃ | 40 sec | |

| 最终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |

4. 结果分析

电泳检测：取10 μL产物，2%琼脂糖凝胶电泳（预期条带560 bp）。

荧光定量：使用qPCR仪，根据Ct值定量。

注意事项

防污染：分区操作（样本制备、PCR配制、扩增区），使用无菌耗材。

引物设计：遵循GC含量40~60%、长度20 bp左右的原则。

抑制剂处理：若样本无扩增，可稀释10倍后复测。

探针保存：避光、避免反复冻融。

应用范围

五倍子药材真伪鉴定

中药材质量控制及分子生物学研究

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