五加皮探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，通过特异性引物和探针实现对五加皮DNA的高灵敏、高特异性检测。适用于物种鉴定、基因表达分析等科研场景。

核心特点：

即开即用：用户仅需提供DNA模板。

高灵敏度：优化引物和探针，检测限低至10拷贝/μL。

双重检测模式：支持定性和定量分析（线性范围5个数量级）。

内控设计：含阳性对照（10^7拷贝/μL），避免假阴性。

兼容性：适配多数DNA提取试剂盒，50次20μL体系反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 反应体系基础液 |

| qRT-PCR酶混合液 | 50μL | 含热启动酶及逆转录酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及样品制备 |

| 引物-探针干粉（50T） | 1管 | 特异性扩增五加皮靶序列 |

| 阳性对照（10^7拷贝/μL） | 50μL | 反应体系质量控制 |

操作流程

1. 标准曲线制备

使用阳性对照进行10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），独立操作避免污染。

稀释步骤：依次取5μL上一浓度溶液加入45μL稀释液，涡旋混匀后冰浴备用。

2. 样品DNA制备

建议设置N+2样本（含阴/阳性对照），采用兼容的DNA提取方法。

3. qPCR反应设置（20μL体系）

定量分析：N+9个反应管（样本、阴性对照、6个梯度标准品）。

程序参数：

逆转录：50℃ 10min → 预变性：95℃ 10min → 40循环（95℃ 15sec，60℃ 60sec，采集FAM信号）。

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性：Ct≤39为阳性，≥40为阴性；39–40间需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，防止交叉污染。

保存条件：-20℃保存，避免反复冻融；运输需2–8℃冰袋。

局限性：

检测结果受样本质量、提取方法及病原体变异影响。

阳性对照泄漏可能导致假阳性，需严格操作规范。

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