乌梅探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的增长，计算Ct值，实现对目标RNA/DNA的定量或定性检测。

产品特点

高灵敏度：可检测低至10²拷贝/μL的模板。

高特异性：引物及探针针对乌梅高度保守区域设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品RNA模板。

内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）及阴性对照，确保结果可靠性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 荧光探针 | 50μL |

| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立定量标准曲线。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒制备样品RNA，建议设置阴/阳性提取对照。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 荧光探针 | 1 |

| RNA模板 | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。

阳性对照需最后加入反应体系。

试剂解冻后需充分混匀并置于冰上使用。

本产品仅限科研使用。

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