马勃探针法PCR鉴定试剂盒

马勃探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列特异性结合。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶序列的定性与定量检测。

产品组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 马勃特异性引物混合液 | 100μL |

| 马勃qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

注：需自备样品RNA模板。

技术特点

高灵敏度：引物与探针针对马勃保守区设计，检测限低至10²拷贝/μL。

特异性强：不与相近物种RNA发生交叉反应。

即开即用：预混优化试剂，简化操作流程。

质控完善：提供阳性对照，区分假阴性结果。

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立分区操作以避免污染。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒制备样品RNA，建议设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探针 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| 模板RNA | 5μL |

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集FAM信号）

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

严格分区操作（试剂配制、样品处理、扩增区），避免交叉污染。

所有离心管及枪头需无核酸酶污染。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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