麻黄根探针法PCR鉴定试剂盒

麻黄根探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品原理

采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过检测荧光强度实现定量/定性分析。

高特异性：针对麻黄根保守基因区域设计引物及探针，避免交叉反应。

产品组成

| 成分 | 规格 | 规格 |

| PCR缓冲液 | 500μL | 975μL反应液 |

| 酶混合液 | 100μL | 25μL扩增液 |

| 引物混合液 | 100μL | 含于反应液 |

| 荧光探针 | 50μL | 含于反应液 |

| 阳性对照 | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL阳性质控品 |

| 阴性对照 | 无（需自备超纯水） | 50μL阴性质控品 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（以10²~10⁷拷贝/μL为例）

梯度稀释阳性对照（6个浓度），避免交叉污染。

每稀释步骤需更换枪头，冰上保存。

2. 样本处理

RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，提取后-15℃以下保存。

质控设置：每批次需设阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。

3. PCR扩增（20μL体系）

反应体系：

探针法缓冲液 10μL

酶混合液 2μL

引物/探针各 1-2μL

模板RNA 5μL

扩增程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

4. 结果分析

定量检测：以Ct值绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct ≥40或无扩增。

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

防污染：实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用滤芯枪头。

质控要求：

阴性对照无扩增（Ct≥40）。

阳性对照Ct≤30且曲线典型。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

重复冻融：避免超过7次，以免降低试剂活性。

公司正在出售的产品