马钱子探针法PCR鉴定试剂盒

马钱子探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：

探针设计：

5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，与靶序列累积量成正比。

检测流程：

逆转录（若检测RNA）：50℃ 30分钟生成cDNA。

预变性：94℃ 10分钟激活酶系统。

扩增循环（40次）：94℃ 15秒（变性），60℃ 1分钟（退火/延伸，采集荧光信号）。

产品特点

高灵敏度与特异性：

引物及探针针对马钱子高度保守区设计，避免与其他物种交叉反应。

检测下限可达10²拷贝/μL。

即开即用：

预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供样品DNA/RNA模板。

质量控制：

含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL无传染性DNA片段）和阴性对照，排除假阴性/污染干扰。

应用范围：

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶（若需）及Taq DNA聚合酶 |

| 荧光探针 | 50μL | 靶标特异性检测 |

| 引物混合液 | 100μL | 扩增靶序列 |

| 阳性对照 | 50μL | 标准曲线建立 |

| 模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10²–10⁷拷贝/μL梯度稀释）：

使用专用稀释液按10倍梯度稀释阳性对照，独立操作避免污染。

2. 样品制备：

提取样品DNA/RNA，建议设置阳性（PC）和阴性对照（NC）。

3. qPCR反应体系（20μL/管）：

| 组分 | 体积 |

| 缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探针 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| 模板 | 5μL |

4. 上机程序：

按预设温度-时间程序运行，分析荧光信号（FAM通道）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

使用带滤芯枪头，定期更换手套。

试剂解冻后需混匀，避免反复冻融。

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