麦冬探针法PCR鉴定试剂盒

麦冬探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法，通过以下步骤实现高特异性检测：

探针设计：探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当Taq酶切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值），结合标准曲线对目标DNA进行定量。

高特异性：引物和探针针对麦冬（Radix ophiopogonis）高度保守序列设计，避免与其他微生物交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qPCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶和Taq DNA聚合酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 麦冬引物-探针混合液 | 100μL | 特异性扩增目标序列 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |

| 说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析指南 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10^1~10^7拷贝/μL）

使用阳性对照按10倍梯度稀释，避免交叉污染。

2. 样本处理

DNA提取：推荐使用兼容的柱式提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2原则）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物-探针混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板DNA | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30分钟（若含RNA模板）

预变性：94℃ 10分钟

扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35或≤39，且扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40，或无扩增。

灰区（35-40）：需复测确认。

注意事项

防污染：操作分区（样本制备区、PCR区），使用带滤芯枪头。

运输与储存：-20℃保存，避免反复冻融；冰袋运输（2-8℃）。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

交叉污染可能导致假阳性；

提取效率差异影响定量准确性。

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