猪痢疾蛇形螺旋体(SH)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

 产品介绍：

猪痢疾蛇形螺旋体(SH)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 是一种专门用于体外定性检测猪痢疾蛇形螺旋体（Serpulina hyodysenteriae，SH）核酸的分子诊断工具。

该试剂盒基于TaqMan荧光探针法实时荧光PCR技术，通过特异性引物和探针靶向SH的保守基因序列，用于猪痢疾（Swine Dysentery）的早期快速诊断、鉴别诊断及流行病学调查。猪痢疾是一种严重危害养猪业的肠道传染病，该试剂盒的高灵敏度和特异性对于疫病防控至关重要。

以下是关于该试剂盒的详细介绍：

检测原理与技术

该试剂盒采用探针法荧光PCR技术，针对猪痢疾蛇形螺旋体特有的DNA序列进行扩增和检测。

靶标基因： 设计一对特异性引物和一条特异性探针，靶向猪痢疾蛇形螺旋体的保守基因区域（通常为16S rRNA基因或特异性功能基因）。

技术原理：

DNA扩增： 试剂盒采用荧光PCR法（不需要逆转录步骤，因为螺旋体是DNA生物）。

信号检测： 在PCR扩增过程中，特异性探针（通常标记为FAM荧光素）与目标DNA序列结合并被酶切，释放出荧光信号。仪器实时监测荧光信号的变化，从而判断样本中是否存在猪痢疾蛇形螺旋体核酸。

质控系统： 试剂盒包含阳性质控品和阴性质控品，用于监控整个检测过程的有效性。

�� 核心性能指标

指标  参数  说明

检测样本  肠内容物、肠系膜淋巴结、粪便（排泄物）  适用于发病猪及带菌猪检测

检测下限  具体数值视产品而定  灵敏度高，可检出微量病原

特异性  强  不与猪肠道内其他常见细菌（如大肠杆菌、沙门氏菌）发生交叉反应

检测时间  约2小时  含DNA提取及PCR扩增步骤

保存条件  -20℃ ±5℃  避光保存，避免反复冻融

�� 典型操作流程

样本采集：

剖检猪： 取肠内容物和肠系膜淋巴结。

活猪： 取排泄物（粪便）。

注意： 采集的样本若不能立即检测，应在2-8℃保存不超过24小时，或-70℃以下长期保存。

DNA提取： 使用试剂盒配套的核酸提取试剂（磁珠法或离心柱法）提取样本中的总DNA。

反应体系配制： 将提取的DNA模板、PCR反应液、酶混合物等按比例加入PCR反应管中。

上机扩增： 放入荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96等）中运行程序。典型的程序包括预变性（95℃ 2分钟）及40-45个循环的PCR扩增（95℃变性，60℃退火/延伸并收集荧光）。

结果判读：

阳性： FAM通道出现典型的S型扩增曲线，且Ct值 ≤ 40，表明样本中存在猪痢疾蛇形螺旋体核酸。

阴性： FAM通道无扩增曲线，或Ct值 > 40。

�� 临床与应用意义

早期诊断： 在猪群出现黏液性或血性下痢等临床症状初期即可确诊，比传统的细菌分离培养更快、更准确。

鉴别诊断： 用于区分猪痢疾与其他引起猪腹泻的疾病（如猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪鞭虫病等）。

种猪引进与净化： 用于检测引进种猪是否携带病原，防止引入传染源；也可用于猪场的定期监测和净化工作。

药敏试验辅助： 结合检测结果，指导临床用药（如泰妙菌素、林可霉素等）及疫苗免疫策略。

⚠️ 注意事项

用途限制： 市场上大多数此类产品明确标注“仅用于科研”或“实验室专用”，不作为临床诊断的唯一依据，购买时需注意产品说明。

防污染： PCR实验室必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），操作人员需穿戴一次性手套和口罩，防止气溶胶污染导致的假阳性。

结果解读： 阳性结果表明存在猪痢疾蛇形螺旋体感染，但需结合猪群的临床症状、病理变化及流行病学史进行综合判断。由于该菌是猪肠道常在菌之一，检出核酸不一定代表发病，需结合载量（Ct值）综合评估。

PCR试剂盒的核心类型：

1. 常规PCR试剂盒

原理：通过引物扩增目标DNA片段，产物经琼脂糖电泳检测。

特点：操作简单、成本低，适用于定性检测（如牛疱疹病毒1型PCR试剂盒）。

典型应用：动物病原体筛查。

2. 荧光定量PCR（qPCR）试剂盒

探针法（TaqMan）：

利用特异性探针结合目标序列，荧光信号实时监测扩增过程。

优势：高特异性（如牛白血病病毒试剂盒）、宽线性范围（10²–10⁷拷贝/μL）。

染料法（SYBR Green）：

染料嵌入双链DNA发光，成本较低，但需优化引物特异性。

3. 恒温扩增试剂盒

技术：LAMP、RPA等，无需热循环仪，适合现场检测。

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