CRISPR基因编辑酶

武汉尚睿生物CRISPR/Cas12a基因编辑酶，18086049136

产品简介

尚睿生物科技有限公司自主研发的专利酶CRISPR/SrCas12a-7（Cas12a） 属于2类V型RNA引导的核酸内切酶，为一种特定来源的微生物基因组中编码的基因(Sr代表尚睿生物缩写)。CRISPR/SrCas12a-7蛋白由向导RNA（crRNA）引导剪切带有特异性序列的单链或双链DNA(ssDNA或dsDNA)。CRISPR/SrCas12a-7 会在PAM 为5' -TTN-3'或者5' -TTTN-3' 的目标DNA 3' 末端约17 个碱基处切割，并留下 5' 末端悬垂末端。CRISPR/SrCas12a-7蛋白在目标 DNA 结合后，CRISPR/SrCas12a-7 max会切割顺式的目标 DNA 和反式的非目标单链 DNA (ssDNA) ，该核酸内切酶在25至42℃范围内具有核酸切割活性。CRISPR/SrCas12a-7在细胞内具有较高的基因组切割活性，混合为SrCas12a-7 /crRNA（核糖核蛋白复合物）后转染细菌或细胞，可快速实现靶基因的高效编辑。

产品名称：SrCas12a-7（Cas12a）

表达系统：E.coli 大肠杆菌 

蛋白分子量：150.88kDa

反应温度：25°C至 42°C 温度范围内具有核酸切割活性

使用范围/产品用途：适用于动植物、水产、微生物细胞内基因编辑

产品特点或优势

（1）在 25°C 至42°C 温度范围内具有核酸切割活性，相对Cas9具有更宽的温度范围，更适合水产生物的基因编辑，

（2）相对Cas9分子质量小，crRNA更短，细胞传递效率更高，

（3）CRISPR/SrCas12a-7 会在PAM 为5' -TTN-3'或者5' -TTTN-3' 的目标DNA 3' 末端约17 个碱基处切割，并留下 5' 末端悬垂末端，与Cas9产生平末端相比，可作为Cas9系统的极大补充，甚至在某些编辑领域中比Cas9系统更具优势，

（4）CRISPR/SrCas12a-7 与crRNA形成的核糖核蛋白（RNP）直接转移到细胞中的方法具有更安全、更快、脱靶效应更低、编辑效率更高等优点。

质量保证（产品标准）

应用案例
1.顺式切割反应体系

推荐反应条件：37℃反应30-60min，85℃灭活5min。

2.注射斑马鱼卵体系

3.酶的切割活性（顺式切割）胶图

真实应用案例

1. 斑马鱼基因组的提取

（1）根据水生动物（鱼类）基因组提取试剂盒说明书进行提取斑马鱼基因组

（2）或使用碱裂解法提取斑马鱼基因组

2. tyr/slc24a5目的基因的扩增

（1）根据基因库斑马鱼tyr/slc24a5基因序列设计上下游引物对目的片段进行PCR扩增。

（2）基因片段与预测条带大小一致

3. 敲除目的基因的sgRNA的制备

（1）可通过网站http://www.rgenome.net/cas-designer/进行Cas12a-7 PAM的sgRNA设计,选择分值最高的sgRNA进行体外活性测定

（2）Cas12a crRNA 转录合成

（3）体外Cas12a-sgRNA活性测定

27℃反应1小时，后加蛋白酶K ，65℃消化15min，设计无sgRNA为对照，电泳检测酶切效果，选择活性高的sgRNA注射鱼卵。

体外目的tyr基因片段Cas12a-sgRNA切割活性的测定结果图

体外目的slc24a5基因片段Cas12a-sgRNA切割活性的测定结果图 

4) 注射斑马鱼卵体系

5) 注射后斑马鱼体色的观察结果

敲除tyr/ slc24a5基因的斑马鱼为绿色

正常对照组的斑马鱼

6) 注射后斑马鱼敲除基因测序结果

公司合成的SrCas12a-7蛋白显微注射（蛋白终浓度209ng/uL）斑马鱼胚胎，共检测16尾，有效检测9尾，突变9尾，群体突变率100%。