小鼠抗特异性IgE抗体(OVAIgE)ELISA试剂盒

小鼠抗特异性IgE抗体(OVAIgE)ELISA试剂盒

产品简介:

实验原理

试剂盒采用双抗体夹心法或间接法。将捕获抗体包被在微孔板上，加入待测样本和酶标记的检测抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。加入底物TMB后，在辣根过氧化物酶（HRP）催化下显色，颜色深浅与样本中IgE抗体浓度呈正相关。通过酶标仪测定吸光度（OD值），结合标准曲线计算样本浓度。

试剂盒组成

预包被微孔板

酶标抗体

标准品

样品稀释液

洗涤液

显色剂

终止液

封板膜等。

样本要求

样本类型：血清、血浆、细胞培养上清等。

处理方法：采集后尽早处理，避免反复冻融；血浆需使用EDTA或肝素抗凝；溶血样本不宜检测。

保存条件：短期保存于4℃，长期保存于-20℃或-80℃。

操作步骤

标准品稀释：按说明书进行梯度稀释。

加样：设空白孔、标准孔和待测孔，加入样本和试剂。

温育：封板后37℃温育一定时间。

洗涤：多次洗涤去除未结合物质。

显色与终止：加入底物显色后，终止液终止反应。

测定：酶标仪测定OD值，计算样本浓度。

性能参数

灵敏度：最低检测限可达0.1-0.31 ng/mL。

特异性：不与结构类似物交叉反应。

重复性：板内变异系数小于10%，板间小于15%。

注意事项

试剂盒需在2-8℃保存，有效期6个月。

避免使用含NaN?的样本，以免抑制HRP活性。

操作需严格按说明书进行，确保结果准确。

注意事项

严格按照说明书操作，避免交叉污染和非特异性结合。

样本避免反复冻融，未用完的板条密封冷藏（2-8℃）保存。

试剂盒组分不可混用，标准品建议一次性使用。

血浆、血清及组织样本需规范处理，避免溶血和杂质干扰。

该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，是兔MIP-3α/CCL20定量检测及相关疾病机制研究的可靠工具，广泛应用于兔免疫、炎症、感染等领域的科研。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。

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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。