小鼠Coagulation factor ⅩⅢelisa试剂盒 新品

小鼠Coagulation factor ⅩⅢelisa试剂盒

产品简介:

实验原理

基于抗原-抗体反应和酶联免疫吸附技术。将特异性抗体包被在微孔板上，加入样本和酶标记的二抗，形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物。加入底物后，酶催化底物显色，通过比色法定量检测目标蛋白的浓度。

试剂盒组成

预包被抗体的微孔板：已包被针对小鼠凝血因子ⅩⅢ的特异性抗体。

酶标记的二抗：辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗小鼠凝血因子ⅩⅢ抗体。

标准品：不同浓度的小鼠凝血因子ⅩⅢ标准品，用于绘制标准曲线。

洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，去除未结合的物质。

底物溶液：TMB等，用于酶催化显色反应。

终止液：硫酸等，用于终止显色反应。

操作步骤

样本准备：按照要求采集和处理样本，避免溶血和高血脂。

加样：在微孔板中加入标准品和样本，温育使抗原-抗体反应充分。

洗涤：去除未结合的物质，避免背景干扰。

加酶标抗体：加入酶标记的二抗，温育形成复合物。

再次洗涤：去除未结合的酶标抗体。

显色：加入底物溶液，避光温育，使酶催化显色。

终止反应：加入终止液，终止显色反应。

测定：使用酶标仪在特定波长（如450nm）下测定吸光度（OD值）。

计算：根据标准曲线，计算样本中凝血因子ⅩⅢ的浓度。

检测范围

通常在pg/mL到ng/mL之间，具体范围请参考试剂盒说明书。

注意事项

样本处理：避免反复冻融，确保样本质量。

试剂准备：试剂盒从冷藏环境中取出后需平衡至室温再使用。

操作规范：使用干净的移液器和试管，避免交叉污染。

洗涤彻底：确保充分去除残留液体，避免影响结果。

避光保存：试剂盒应避光保存，避免光照影响试剂活性。

实验重复：建议进行多次实验，确保结果的准确性和可靠性。

应用场景

科研研究：用于研究小鼠凝血因子ⅩⅢ在生理和病理过程中的作用。

疾病诊断：辅助诊断与凝血功能异常相关的疾病。

药物筛选：评估药物对凝血因子ⅩⅢ表达的影响。

注意事项

严格按照说明书操作，避免交叉污染和非特异性结合。

样本避免反复冻融，未用完的板条密封冷藏（2-8℃）保存。

试剂盒组分不可混用，标准品建议一次性使用。

血浆、血清及组织样本需规范处理，避免溶血和杂质干扰。

该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，是兔MIP-3α/CCL20定量检测及相关疾病机制研究的可靠工具，广泛应用于兔免疫、炎症、感染等领域的科研。

常见问题解答 (FAQ)

Q1: 为什么要做“复孔”？

A: 建议每个样本（包括标准品）都做复孔（2-3个孔）。这样可以计算平均值，减少操作误差，提高数据的可信度。

Q2: 样本需要稀释吗？

A: 是的。如果样本浓度过高，超出了标准曲线的检测范围，需要根据预实验结果进行适当稀释。计算最终浓度时，记得乘以稀释倍数。

Q3: 结果出现“花板”（背景不均）怎么办？

A: 可能原因包括：洗板不干净、温育温度不均、加样时产生气泡、或者试剂（如底物）受光照分解。请检查洗板机是否堵塞，确保温育箱温度恒定。

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如何验证试剂盒的特异性？（实操建议）：

稀释线性实验 (Linearity)：

操作： 将高浓度的阳性样本用稀释液进行梯度稀释（如1:2, 1:4, 1:8...）。

预期： 测得的浓度值与稀释倍数应呈良好的线性关系（相关系数 R² ≥ 0.98）。如果线性不好，说明样本基质中有干扰物影响了特异性结合。

干扰实验 (Interference Test)：

操作： 在已知浓度的目标抗原溶液中，加入高浓度的潜在干扰物（如高浓度的脂质或结构类似物），检测其对结果的影响。

预期： 若检测值与理论值偏差在±10%以内，说明抗干扰能力强，特异性好。

回收实验 (Recovery Test)：

操作： 在样本中加入已知量的标准品，检测总含量，计算回收率。

预期： 回收率在80%-120%之间，说明试剂盒能准确识别目标，不受样本背景干扰。