C666-1人鼻咽癌细胞 新品

商品属性

生长特性：贴壁生长，上皮样形态

培养条件

培养基：RPMI-1640 + 10%胎牛血清（FBS） + 1%青霉素-链霉素（P/S）

气相环境：5% CO₂，95%空气，37℃恒温培养

冻存条件：90% FBS + 10% DMSO

细胞背景

C666-1细胞系源自无胸腺裸鼠异种移植物（xeno-666），为研究鼻咽癌的常用模型，需提供STR鉴定报告以确保细胞身份。

操作流程

1. 复苏步骤

预热培养基至37℃，准备8 mL预热的完全培养基于15 mL离心管中。

从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴复温（1~2分钟内完全解冻），避免冻存管管口接触水。

酒精消毒冻存管后转移至超净台，将细胞悬液加入离心管，轻轻吹打混匀。

800 rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，补足培养基后置于培养箱。

24小时后观察贴壁情况，更换培养基以去除死细胞。

2. 传代步骤

弃去旧培养基，用PBS（无Ca²⁺/Mg²⁺）清洗1~2次。

加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液（T25瓶1~2 mL），37℃消化1~3分钟，显微镜下观察细胞变圆脱落时终止消化（加入3~4 mL完全培养基）。

收集细胞悬液，1000 rpm离心5分钟，弃上清，重悬后按1:2比例分瓶培养。

3. 冻存步骤

选择对数生长期细胞，消化离心后计数，调整密度至5×10⁶~1×10⁷ cells/mL。

加入无血清冻存液（如90% FBS + 10% DMSO），分装至冻存管（1 mL/管），标记后程序降温或直接转移至液氮长期保存。

注意事项

质量控制：定期检测支原体污染，建议传代3~5次后重新冻存备份。

培养观察：贴壁细胞需保持均匀分布，避免过度消化或机械损伤。

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