病毒性神经坏死病毒（VNNV）RNA检测试剂盒（恒温荧光法）

商品属性：

产品核心价值与水产应用

病毒性神经坏死病毒（VNNV）是严重危害海水鱼类的病原体，可导致幼鱼大规模死亡和成鱼神经系统损伤。本试剂盒采用恒温荧光扩增技术（RAA/LAMP法），突破传统PCR对仪器的依赖，具有以下核心优势：

现场快速检测：25分钟内完成从样本到结果（传统PCR需2小时）

便携式操作：仅需金属浴或恒温仪（无需复杂PCR仪）

高灵敏度：检测限达10拷贝/μL，适用于低病毒载量样本

养殖场适用：无需专业实验室，满足基层检测需求

二、技术原理与创新设计

1. 恒温扩增原理

靶标基因：VNNV RNA2片段编码的RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）保守区

技术体系：

重组酶辅助扩增（RAA）：重组酶+单链DNA结合蛋白实现常温核酸扩增

荧光探针：FAM标记的exo探针，实时监测扩增信号

防污染设计：反应体系预装冻干粉，开盖即用

2. 技术突破

参数  性能指标

反应温度  39℃恒温（±2℃耐受）

检测时间  15-25分钟（视病毒载量而定）

特异性  不与RGNNV、SJNNV等交叉反应

样本兼容性  海水鱼脑/视网膜组织、鱼卵、水体

三、试剂盒组分与储存

1. 核心组分

冻干扩增微球：含RAA酶、dNTPs、引物探针（单管预装）

样本裂解液：快速释放RNA（免核酸提取）

阳性对照：VNNV RdRp基因RNA片段

阴性对照：无核酸水

荧光校准卡：用于便携式检测仪信号校准

2. 储存与运输

未开封：4℃保存12个月，-20℃延长至24个月

复溶后：立即使用（不可保存）

运输条件：常温（≤25℃）或4℃冷链

四、样本采集与快速处理

1. 最佳样本类型

样本类型  采集要求

病鱼脑组织  取50mg（避开骨骼）

鱼卵  5-10枚匀浆

养殖水体  滤膜浓缩100mL→1mL

2. 关键注意事项

采样时机：幼鱼游动异常或螺旋式游泳时立即采样

防RNA降解：

组织样本离体后30秒内放入裂解液

避免反复冻融（≤1次）

简化流程：

无需RNA提取，裂解液直接上样

浑浊样本需离心（3000rpm×2min）

五、检测操作流程

1. 反应体系（25μL）

步骤  操作

裂解样本  10μL样本+90μL裂解液，涡旋混匀

加样  取5μL裂解产物加入冻干微球管

启动反应  39℃恒温反应，实时监测FAM信号

2. 结果判读

阳性：荧光信号呈指数上升（阈值时间≤20分钟）

阴性：无荧光增长或阈值时间>25分钟

无效：阳性对照无信号（检查温度控制）

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