病毒总提取试剂盒（磁珠法）

一、试剂盒核心信息：

适用范围

样本类型：血清/血浆、细胞培养上清、组织匀浆、粪便、环境样本（如污水）等。

病毒类型：包膜/无包膜病毒（如流感病毒、诺如病毒、腺病毒等），兼容RNA/DNA病毒同步提取。

方法原理

磁珠法核酸吸附：

裂解液释放病毒核酸 → 硅基磁珠特异性结合核酸 → 磁场分离 → 洗脱纯化。

添加载体RNA（如MS2噬菌体RNA）防止微量核酸降解。

技术优势

高灵敏度：可提取低至102病毒颗粒/mL的样本。

抗干扰性：耐受血液、胆汁、腐殖酸等复杂基质。

二、试剂盒组分与操作流程

1. 核心组分

组分  功能说明

裂解缓冲液  含离液盐（如盐酸胍）和蛋白酶，高效破坏病毒衣壳。

磁珠悬浮液  硅基超顺磁珠（粒径1-3μm），表面修饰羧基增强核酸结合力。

洗涤缓冲液  去蛋白/去盐溶液（含乙醇），分Wash Buffer I/II两阶清洗。

无核酸酶洗脱液  低离子强度TE缓冲液（pH 8.0），兼容下游PCR/测序。

2. 操作步骤（以200μL血清为例）

裂解：样本 + 裂解液 + 载体RNA，涡旋混匀，室温静置10分钟。

结合：加入磁珠，涡旋吸附5分钟。

洗涤：磁场分离弃上清，用Wash Buffer I/II各洗两次。

洗脱：50-100μL洗脱液，65℃孵育5分钟，收集核酸。

三、性能与质量控制

1. 关键参数

指标  性能标准

提取效率  ≥90%（10病毒颗粒样本）

纯度（A260/280）  1.8-2.0（无蛋白/多糖污染）

片段范围  100bp-50kb（适配NGS建库）

2. 质控建议

外源内标：添加假病毒（如Phocine Herpesvirus）监控提取效率。

抑制物检测：同步提取人源β-actin基因，排除PCR抑制。

四、注意事项

样本处理

血浆需EDTA抗凝（避免肝素抑制PCR）。

粪便样本需预离心去固体杂质。

存储条件

裂解后样本可-80℃保存1个月，磁珠悬浮液避免冻融。

生物安全

高危病毒（如埃博拉）需在BSL-3实验室提取。

五、应用场景

临床诊断：新冠病毒、HIV等RNA病毒核酸检测。

环境监测：污水中的脊灰病毒溯源。

科研领域：病毒宏基因组（Virome）研究。

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