病猪蓝耳高致病/NADC-30株（PRRSV-M/PRRSV-NADC30）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

病猪蓝耳高致病/NADC-30株（PRRSV-M/PRRSV-NADC30）检测试剂盒（双重荧光PCR法）

试剂简介：

一、产品核心价值与流行病学意义

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）高致病性毒株（PRRSV-M）和NADC-30-like毒株是当前猪场主要流行株。本试剂盒基于双重荧光PCR技术，同步检测：

PRRSV-M：ORF5基因变异株（Nsp2缺失特征）

NADC-30-like：重组株特异性标记（ORF5 RFLP 1-7-4型）

核心应用场景：

疫情预警：早期鉴别高致病株与重组株感染

疫苗选择：指导MLV疫苗（如JXA1-R）或灭活疫苗使用

净化监测：种猪场PRRSV阴性群维持

引种检疫：杜绝带毒猪只入场

二、技术原理与创新设计

1. 双重检测体系

靶标  荧光通道

PRRSV-M (Nsp2缺失)  FAM

NADC-30 (ORF5-RFLP)  HEX

内参（猪β-actin）  ROX

2. 技术创新

双重内参：猪β-actin（组织样本）+ MS2噬菌体（环境样本）

抗抑制设计：耐受血清、组织匀浆中的血红素与脂肪

防交叉污染：dUTP/UNG系统降解残留扩增产物

三、试剂盒组分与储存

1. 核心组分

RT-PCR预混液：含逆转录酶、热启动Taq酶、dNTPs（冻存管装）

双重引物探针混合液（冻干粉，复溶后50μL/管）

阳性对照：含PRRSV-M和NADC-30基因片段

阴性对照：无核酸水（DEPC处理）

提取控制品：人工RNA片段

2. 储存与运输

未开封：-80℃保存12个月，-20℃稳定3个月

复溶后：4℃保存≤72小时（避免反复冻融）

运输：干冰（<-60℃）或2-8℃冷链（≤72小时）

四、样本采集与处理规范

1. 最佳样本类型

样本类型  采集要求

血清  无菌采集2-3mL，避免溶血

肺/淋巴结  100mg组织+1mL PBS匀浆

精液  1mL+等量PBS稀释

环境拭子  猪栏/车辆表面采样，悬浮于2mL PBS

2. 关键注意事项

采样时机：

急性期：发热后3-5天（病毒血症高峰）

持续感染：间隔2周重复检测

防RNA降解：

组织样本离体后立即放入RNA保存液

血清/精液4℃保存≤24小时，-80℃长期保存

核酸提取：

推荐磁珠法RNA提取试剂盒

每批加入MS2噬菌体监控提取效率

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