伯氏疏螺旋体(BB)检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

伯氏疏螺旋体(BB)检测试剂盒(荧光PCR法)

试剂简介：

一、试剂盒核心信息

检测目标

特异性检测**伯氏疏螺旋体（B. burgdorferi sensu lato复合群）**的DNA，包括：

鞭毛蛋白基因（flaB）——高保守靶点，属水平检测

外膜蛋白基因（ospA或ospC）——分型鉴别（如B. burgdorferi sensu stricto vs B. afzelii）

覆盖病原型：莱姆病主要致病种（欧亚B. garinii/B. afzelii，北美B. burgdorferi ss）。

方法原理

双重荧光PCR：

flaB-FAM探针（通用检测） + ospA-HEX探针（分型），内标（Cy5）监控提取与扩增。

采用抗抑制剂聚合酶，适配高蛋白样本（如关节液）。

适用样本

临床：皮肤活检（游走性红斑）、关节液、脑脊液（神经莱姆病）

媒介：蜱虫（全虫或中肠匀浆）

二、试剂盒组分与操作流程

PCR预混液  含热启动Taq酶、dNTPs、优化缓冲液（适配高多糖/蛋白样本）

探针引物混合液  flaB-FAM/ospA-HEX探针，内标（人工合成DNA，Cy5标记）

阳性对照  灭活B. burgdorferi B31株DNA

DNA提取试剂  磁珠法（兼容蜱虫几丁质复杂样本）

2. 操作步骤

样本处理：

皮肤组织：液氮研磨后裂解，离心取上清。

蜱虫：75%乙醇表面消毒，PBS匀浆后提取DNA。

PCR程序（30μL体系）：

95℃ 5min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×45 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）

三、性能与结果解读

1. 关键参数

指标  性能要求

灵敏度  1拷贝/μL（纯DNA）

特异性  不与回归热疏螺旋体、钩端螺旋体交叉

抗干扰性  耐受10%关节液或蜱组织杂质

2. 结果判读

阳性：

flaB（FAM）Ct≤35 → 伯氏疏螺旋体感染。

ospA（HEX）Ct≤35 + 熔解曲线分析 → 种水平鉴别（如B. afzelii熔解峰78℃）。

无效检测：内标（Cy5）无扩增 → 需复查采样或提取步骤。

四、注意事项

采样时效性

游走性红斑期（早期局部感染）检出率＞90%，晚期样本（如关节炎）需提高采样量。

生物安全

伯氏疏螺旋体属三类病原，实验废弃物需121℃高压灭菌。

局限性

不能区分活菌/死菌，PCR阳性需结合抗体检测（如Western Blot）确认活动性感染。

五、应用场景

临床诊断：莱姆病早期确诊（抗体窗口期前），尤其疫区不明原因发热病例。

媒介监测：蜱虫带毒率调查（如全沟硬蜱的病原筛查）。

科研应用：菌株遗传变异分析（ospC基因分型关联致病性）

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