布氏杆菌(BS)检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

布氏杆菌(BS)检测试剂盒(荧光PCR法)

试剂简介：

一、检测目标与技术优势

1.1 布氏杆菌特征

病原学：革兰阴性胞内寄生菌，含6个经典种（如羊种B.melitensis 、牛种B.abortus ）

靶基因：

bcsp31基因（31kDa外膜蛋白，属特异性标记）

IS711插入序列（种型鉴别关键）

临床意义：

人畜共患布病（波状热）诊断

动物检疫（流产、睾丸炎等）

1.2 技术优势

灵敏度：10 CFU/mL（比传统培养法高100倍）

时效性：3小时出结果（培养法需5-7天）

安全性：避免活菌操作风险（BSL-3病原体）

二、试剂盒组成与样本处理

2.1 核心组分（50测试/盒）

组分  技术特性

核酸提取试剂  含溶菌酶+蛋白酶K的革兰阴性菌破壁系统

PCR预混液  含抗血液抑制因子（兼容全血/乳汁等复杂样本）

探针系统  FAM-bcsp31/HEX-IS711双通道，可区分羊/牛/猪种

质控品  灭活B.melitensis 16M株（阳性）、健康人血清（阴性）、内标（人GAPDH）

2.2 样本采集规范

人类样本：

急性期血液（EDTA抗凝，4℃保存≤72h）

骨髓（慢性期检出率更高）

动物样本：

流产胎儿胃内容物（需无菌采集）

乳汁（离心取脂肪层）

三、标准化检测流程

3.1 操作步骤

核酸提取（40分钟）

血液样本：QIAamp DNA Blood Mini Kit（回收率＞90%）

组织样本：机械破碎+酚氯仿抽提

PCR扩增（2小时）

反应体系（25μL）：

预混液12.5μL + 引物探针2.5μL + 模板5μL + 补水5μL

循环程序：

95℃ 5min → 45×[95℃ 15sec → 60℃ 45sec]（双通道采集）

3.2 结果解读

检测指标  阳性阈值

bcsp31(FAM)  Ct≤35

IS711(HEX)  Ct≤35

内标  25-30

四、质量控制与注意事项

4.1 质控要点

提取效率：添加外源λDNA（Ct值＞32需重新提取）

交叉反应：与耶尔森菌、土拉菌无交叉（经CLSI验证）

4.2 2025年升级

微滴数字PCR：绝对定量菌载量（科研版）

CRISPR-Cas12a：新增肉眼判读模块（现场筛查版）

五、应用与局限

5.1 典型应用

疫情溯源：养殖场暴发调查（48小时完成群体筛查）

治疗效果监测：抗生素治疗2周后载量下降评估

5.2 局限性

种型覆盖：需补充MLVA分型鉴别疫苗株（如Rev.1）

活菌鉴别：建议联用BCSP31-ELISA确认活动性感染

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