草鱼出血病II型病毒（GCRV II）RNA检测试剂盒（恒温荧光法）

草鱼出血病II型病毒（GCRV II）RNA检测试剂盒（恒温荧光法）

试剂简介：

检测目标：特异性检测草鱼出血病II型病毒（Grass Carp Reovirus II, GCRV II），该病毒是引致草鱼出血病的主要病原体，可导致鱼体充血、肝脾坏死等高死亡率病症。

方法原理：基于恒温荧光扩增技术（如RT-LAMP或RPA），靶向GCRV II的S7基因（编码RNA聚合酶），通过荧光染料（如SYTO 9）或探针实时监测扩增信号，60-65℃恒温反应，无需复杂热循环仪。

适用样本：鱼体组织（肝、脾、肾）、水体滤膜、鱼卵等。

检测流程

样本处理

组织样本：取50 mg组织匀浆，加入TRIzol裂解后离心取上清。

水体样本：0.22 μm滤膜过滤浓缩，或直接离心富集病毒颗粒。

RNA提取

推荐快速提取法（如磁珠法或煮沸法），需加入RNA酶抑制剂防止降解。

恒温扩增

反应体系：

引物：6条特异性引物（靶向S7基因保守区）。

荧光染料：SYTO 9（实时监测）或钙黄绿素（终点检测）。

反应条件：65℃恒温扩增30分钟，荧光信号每30秒采集一次。

结果判读

阳性：荧光信号指数增长且ΔRn≥0.5。

阴性：无显著荧光升高（需排除RNA降解或抑制物干扰）。

3. 性能参数

指标  参数要求

灵敏度  ≤100 copies/μL

特异性  不与GCRV I/III型或其他鱼类呼肠孤病毒交叉

检出限  95%检出率（10^2 copies/mg组织）

抗干扰性  耐受10%鱼体黏液或水体腐殖酸

4. 注意事项

假阴性控制：

病毒RNA易降解，样本需立即检测或-80℃保存。

水体样本需浓缩（如超滤离心）以提高检出率。

生物安全：操作需在生物安全柜中进行，避免气溶胶污染。

质控要求：每批次需包含：

阴性对照（健康鱼组织提取RNA）。

阳性对照（含S7基因体外转录RNA）。

5. 应用场景

水产养殖：草鱼苗种检疫、发病鱼群快速诊断。

疫病防控：养殖场水体病毒监测，阻断垂直传播（鱼卵消毒效果评估）。

科研领域：GCRV II分子流行病学研究。

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