产气荚膜梭菌检测试剂盒 新品

商品属性：

检测目标与临床意义

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）

主要毒素基因：

cpa（α毒素，磷脂酶C，所有菌株携带）

cpb（β毒素，A/B型菌株）

etx（ε毒素，B/D型菌株）

iap（β2毒素，部分致病株）

致病关联：

食物中毒（肠毒素cpe基因）

气性坏疽（伤口感染）

坏死性肠炎（动物）

技术原理

多重荧光PCR：

通道1（FAM）：cpa（种属鉴定）

通道2（HEX）：cpe（肠毒素检测）

可选通道（CY5）：cpb/etx（分型检测）

灵敏度：102-103 CFU/g（直接检测），10 CFU/g（增菌后）

二、试剂盒组成与样本处理

核酸提取模块  含溶菌酶+蛋白酶K的革兰氏阳性菌破壁系统

PCR预混液  含抗抑制剂（兼容粪便、组织等复杂基质）

引物探针混合液  四通道配置（FAM/HEX/CY5/ROX内标）

对照系统  阳性对照（ATCC 13124）、阴性对照、提取对照（ZymoBIOMICS标准品）

样本类型与处理

临床样本：

粪便（推荐1:10稀释降低抑制物）

伤口分泌物（需厌氧运输培养基）

食品样本：

肉类制品（25g+225mL强化梭菌培养基，37℃厌氧增菌8h）

乳制品（离心富集脂质层中的芽孢）

三、标准化检测流程

操作步骤

核酸提取

破壁关键：95℃ 10min+冰浴骤冷（促进芽孢DNA释放）

磁珠法提取（20min完成，洗脱体积50μL）

PCR反应体系

25μL体系：

预混液12.5μL + 引物探针混合液3μL + 模板5μL + 补水4.5μL

扩增程序：

50℃ 2min → 95℃ 10min → 45×[95℃ 15sec → 60℃ 1min]（四通道采集）

结果判读标准

检测靶标  阳性Ct值

cpa  ≤35

cpe  ≤35

cpb  ≤35

四、质量控制与注意事项

关键质控要求

提取效率：内标（ROX）Ct值应≤30，否则需重复提取

交叉验证：

阳性样本建议接种TSC培养基（黑色菌落+双溶血环）

可疑结果（Ct 35-38）应进行Nagler试验（卵黄琼脂抑制试验）

2025年技术升级

数字PCR定量：可选ddPCR模块，绝对定量毒素基因拷贝数

快速检测版：结合RPA等温扩增，15分钟出结果（限cpa检测）

五、应用场景与局限性

典型应用

食源性疾病暴发调查：同步检测cpa+cpe，2小时锁定致病源

兽医诊断：鉴别etx阳性菌株（羔羊痢疾等）

局限性说明

分型限制：需单独引物组区分C/D型菌株

活菌鉴别：建议结合选择性培养（如卵黄琼脂毒素表型验证）

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