肠出血性大肠杆菌 O157:H7 检测试剂盒 新品

肠出血性大肠杆菌 O157:H7 检测试剂盒

一、核心检测目标：

病原体特征

O157:H7血清型：产志贺毒素（Stx1/Stx2）和溶血素（hlyA），引发出血性结肠炎和溶血性尿毒综合征（HUS）。

靶基因：

rfbE（O157抗原特异性）

fliC（H7鞭毛蛋白基因）

stx1/stx2（毒力基因，需分型检测）。

方法原理

多重荧光PCR：单管同步检测O157:H7标志基因（FAM/HEX通道）及内标（Cy5通道）。

技术优势：灵敏度达1-10 CFU/g粪便，较传统培养法（24-48小时）提速至2小时。

二、试剂盒组分与操作

1. 核心组分

组分  功能说明

预混液  含热启动Taq酶、dNTPs、抗抑制缓冲液（适配粪便样本）

引物探针组  rfbE-FAM/fliC-HEX/stx1-stx2-VIC（可选毒力分型）

内标（IC）  人工合成DNA片段（Cy5通道），监控提取与扩增效率

阳性对照  灭活O157:H7（ATCC 43895标准株）

2. 操作流程

样本前处理：

粪便：1:10稀释后离心取上清，或使用增菌肉汤（TSB+新生霉素）培养6小时。

食品：25g样本+225mL mEC+n肉汤增菌。

核酸提取：磁珠法优先（兼容高脂/高色素样本）。

PCR程序：

95℃ 3min → [95℃ 10s → 60℃ 30s]×40 cycles（FAM/HEX/Cy5同步采集）

三、性能与判读标准

1. 关键参数

指标  要求

灵敏度  ≤10 CFU/反应（增菌后）

特异性  不与O145:H28等STEC交叉

抗干扰性  耐受20%胆汁/血红蛋白

2. 结果解读

阳性：

rfbE（FAM）Ct≤35 且 fliC（HEX）Ct≤35 → 确认O157:H7。

stx1/stx2阳性提示高毒力株（需报告临床预警）。

无效检测：内标Ct>35（需复查提取步骤）。

四、注意事项

采样要求

腹泻患者：发病3天内粪便样本（毒素分泌高峰期）。

食品：优先检测牛肉馅、生乳、芽苗菜。

局限性

无法区分活菌/死菌（建议结合培养验证）。

非O157 STEC（如O104:H4）需额外引物组。

生物安全

实验后需121℃高压灭菌废弃物（生物安全等级2）。

五、应用场景

临床诊断：快速鉴别出血性腹泻病原（区别于志贺菌、空肠弯曲菌）。

食品安全：肉类加工厂HACCP关键控制点监测。

暴发调查：PFGE分型前初筛（需保存阳性样本）。

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