肠道病毒 70 型检测试剂盒

肠道病毒 70 型检测试剂盒

试剂简介：

检测目标

特异性检测**肠道病毒70型（Enterovirus 70, EV70）**的RNA，靶向VP1基因保守区域。

临床关联：EV70是急性出血性结膜炎（AHC）的主要病原体，可引发角膜病变及神经系统并发症。

方法原理

荧光RT-PCR：

采用TaqMan探针法（FAM标记），同步逆转录与扩增，避免气溶胶污染。

内标（IC）：HEX通道监控样本质量（如人源RNase P基因）。

适用样本

结膜拭子、泪液、咽拭子、脑脊液（罕见并发症病例）。

二、试剂盒组分与操作流程

RT-PCR预混液  含逆转录酶、热启动Taq酶、dNTPs（优化抗泪液/黏液抑制物）。

引物探针混合液  EV70特异性引物（如EV70-VP1-F/R）及FAM探针，内标HEX探针。

阳性对照  灭活EV70 RNA（ATCC VR-836标准株）。

阴性对照  无核酸水。

核酸提取试剂  兼容拭子样本的磁珠法试剂（含载体RNA防降解）。

2. 操作步骤

样本处理：

结膜拭子：置于病毒保存液中涡旋震荡，离心取上清。

泪液：直接加入裂解液（需浓缩处理）。

核酸提取：建议使用配套试剂，同步提取内标。

PCR扩增（20μL体系）：

程序：50℃ 15分钟（RT）→ 95℃ 3分钟 → 40循环（95℃ 10秒 → 60℃ 30秒）。

三、结果解读与性能参数

1. 结果判读标准

通道  阳性判定（Ct值）

FAM  ≤35（S型曲线）

HEX  ≤30

2. 关键性能指标

指标  参数

灵敏度  ≤20拷贝/反应（纯RNA）

特异性  不与CA24v（AHC相关病毒）交叉

检出限  50 TCID50/mL（结膜拭子）

抗干扰性  耐受15%黏液或眼部分泌物

四、注意事项与常见问题

质量控制

结膜采样需避免角膜损伤，采样后立即低温运输（2-8℃）。

内标失效可能因采样量不足或RNase污染。

局限性

不能区分EV70亚型，需测序确认变异株（如东南亚流行株）。

康复期患者可能持续排毒，需结合IgM抗体检测判断活动性感染。

常见问题

Q：能否用于无症状携带者筛查？

A：可检测，但阳性率低，建议暴发期重点人群（如医护人员）监测。

Q：与病毒培养相比的优势？

A：RT-PCR耗时短（2h vs 7天），灵敏度高（尤其对早期病例）。

五、应用场景

临床诊断：快速确诊急性出血性结膜炎，区分细菌性结膜炎。

疫情控制：EV70暴发时追踪传播链（如医院、学校）。

研究用途：病毒变异监测（VP1基因易突变）。

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