肠道病毒通用 / 人博卡病毒检测试剂盒( 双重荧光 PCR 法 )

商品属性：

检测目标：

肠道病毒通用型（EV）：包括柯萨奇病毒（CV）、埃可病毒（ECHO）等，靶向5'-UTR保守区。

人博卡病毒（HBoV）：靶向NS1基因（分型1-4，以HBoV1为主）。

方法原理：双重荧光PCR（FAM通道检测EV，HEX/VIC通道检测HBoV），同步扩增避免交叉污染。

适用样本：粪便（首选）、咽拭子、脑脊液（EV相关脑膜炎）。

2. 检测流程

样本处理

粪便：取0.1 g加1 mL PBS匀浆，离心取上清（避免颗粒物干扰）。

咽拭子：置于病毒保存液（如UTM）中震荡洗脱。

核酸提取

推荐磁珠法（如Qiagen Viral RNA Mini Kit），同步提取DNA/RNA（EV为RNA病毒，HBoV为DNA病毒）。

PCR扩增

反应体系：

EV引物探针：靶向5'-UTR（FAM标记）。

HBoV引物探针：靶向NS1（HEX标记）。

内参：RNase P（CY5通道，监控提取效率）。

循环程序：95℃ 3min →（95℃ 15s → 60℃ 45s）×45循环。

结果判读

阳性：Ct≤35（FAM/HEX），且内参Ct≤30。

阴性：无扩增曲线或Ct≥38。

3. 性能参数

指标  EV参数

灵敏度  ≤50 copies/反应

特异性  不与鼻病毒交叉

检出限  10^2 copies/g粪便

抗干扰性  耐受10%黏液或胆汁盐

4. 注意事项

假阴性风险：

EV易降解，RNA需立即提取或保存于-80℃。

HBoV低载量时（<10^3 copies/mL）建议重复检测。

生物安全：EV属BSL-2病原体，操作需在生物安全柜中进行。

质控要求：每批次需包含：

阴性对照（无核酸水）。

阳性对照（含EV/HBoV混合质粒）。

5. 应用场景

临床诊断：

EV：手足口病（CV-A16/EV71）、无菌性脑膜炎。

HBoV：儿童急性呼吸道感染（尤其合并喘息）。

公共卫生：托幼机构聚集性疫情快速筛查。

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