肠道病毒通用型检测试剂盒 / 含内标

商品属性：

检测目标

广谱检测**肠道病毒属（Enterovirus, EV）**的RNA，包括：

脊髓灰质炎病毒（PV）、柯萨奇病毒（CV-A/B）、埃可病毒（Echovirus）、EV-D68等。

含内标（Internal Control, IC）：监控样本采集、提取及扩增全过程，避免假阴性。

 方法原理

实时荧光RT-PCR：针对肠道病毒5'-UTR保守区设计引物探针，同步逆转录（RT）与扩增（PCR），通过荧光信号定性检测。

适用样本

粪便、肛拭子、咽拭子、脑脊液（CSF）、血清及环境样本（污水）。

二、试剂盒组成

组分  作用说明

RT-PCR预混液  含逆转录酶、Taq酶、dNTPs、缓冲液（优化抑制物耐受性）。

引物探针混合液  肠道病毒通用引物（如EV-U1/EV-U2）及探针（FAM标记），内标引物（HEX标记）。

内标（IC）  人工合成RNA片段，全程监控提取与扩增效率。

阳性对照  灭活肠道病毒（如CV-B5）RNA。

阴性对照  无核酸水。

三、操作流程

样本处理

RNA提取：推荐磁珠法或柱提法，粪便样本需匀浆离心去杂质。

内标添加：提取前加入IC（或试剂盒预包被），确保提取有效性。

RT-PCR扩增

反应体系（20μL示例）：

组分  体积（μL）

RT-PCR预混液  15

引物探针混合液  3

模板RNA  2

程序设置（两步法）：

逆转录：50℃ 15分钟 → 预变性：95℃ 3分钟 → 循环：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环）。

结果判读

肠道病毒阳性：FAM通道Ct值≤35，且扩增曲线呈S型。

内标有效性：HEX通道Ct值≤30（若无效，需重复检测）。

阴性：FAM无扩增且内标正常。

四、性能参数

指标  参数要求

灵敏度  ≤50拷贝/反应（纯RNA）

特异性  不与鼻病毒、甲肝病毒等交叉反应

检出限  102-103病毒颗粒/g（粪便样本）

抗干扰性  耐受10%血液或胆汁抑制物

五、注意事项

质量控制

每批检测需包含阴阳性对照，内标失效时需排查原因（如提取失败或PCR抑制）。

样本保存

RNA易降解，采集后-80℃保存（避免反复冻融）。

生物安全

高风险样本（如CSF）需在BSL-2实验室操作。

六、应用场景

临床诊断：快速筛查手足口病（HFMD）、无菌性脑膜炎等。

疫情防控：监测EV-D68等新兴毒株的暴发。

疫苗评估：脊髓灰质炎灭活疫苗（IPV）接种后病毒排泄监测。

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