肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）检测试剂盒(荧光PCR法)

试剂简介：

检测目标

特异性检测**肠炎沙门氏菌（Salmonella Enteritidis, SE）**的核酸片段（如保守基因invA、sefA或prot6E）。

可区分其他沙门氏菌血清型（如S. Typhimurium）或相近肠道病原菌。

方法原理

荧光定量PCR（qPCR）：通过特异性引物和TaqMan探针扩增SE靶基因，实时监测荧光信号，实现高灵敏度（≤10 CFU/mL）和特异性检测。

适用样本

食品（肉类、蛋类、乳制品）、粪便、环境样本（饲料、水样）及临床分离株。

二、试剂盒组成

核心组分

PCR预混液：含热启动Taq酶、dNTPs、Mg2缓冲液。

引物探针混合液：针对SE特异性基因设计（如sefA）。

内标（IC）：监控提取与扩增效率，避免假阴性。

阳性对照（SE DNA）与阴性对照（无核酸水）。

辅助材料

DNA提取试剂（磁珠法/柱提法）、八联管、封膜等。

三、操作流程

样本前处理

增菌培养：食品样本需在缓冲蛋白胨水（BPW）或Rappaport-Vassiliadis培养基中增菌18-24小时。

DNA提取：取增菌液提取DNA，建议使用试剂盒配套提取方法。

PCR扩增

反应体系配制（示例：20μL体系）：

预混液15μL + 模板DNA 5μL。

扩增程序（两步法）：

预变性：95℃ 3分钟 → 循环阶段：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环）。

结果分析

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型（需排除引物二聚体干扰）。

阴性：无扩增曲线或Ct值>38（需结合内标判断是否有效）。

四、性能参数

指标  参数示例

灵敏度  1-10 CFU/反应（增菌后）

特异性  不与大肠杆菌、志贺氏菌等交叉反应

重复性  批内/批间CV≤5%

五、应用场景

食品安全监测：快速筛查食品中的SE污染，符合GB 4789.4等标准。

临床诊断：辅助腹泻病原体鉴别（需结合培养鉴定）。

养殖场防控：追踪禽类（如蛋鸡）沙门氏菌携带状态。

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