袋鼠肾细胞；Pt-K1 新品

                                                          袋鼠肾细胞；Pt-K1
产品信息：

来源与背景

源自袋鼠（Potorous tridactylus）肾脏组织，由ATCC保藏。

应用领域：

细胞遗传学研究：染色体结构与数目变异分析（Pt K1细胞仅含22条染色体） ；

病毒学研究：作为多种病毒（如呼肠孤病毒）的增殖宿主 ；

毒理学实验：环境污染物对肾细胞的毒性评估。

形态与生长

形态：上皮细胞样，呈多边形铺路石状。

生长特性：严格贴壁生长，形成致密单层，增殖速度中等（传代周期2-3天）。

关键优势：对培养环境适应性强，可在含10%胎牛血清的MEM培养基中稳定生长。

二、培养操作指南

培养体系与条件

基础培养基  MEM（含NEAA）或EMEM

添加成分  10%胎牛血清（FBS） + 1%青霉素-链霉素（P/S）

培养环境  温度：37℃ ；

气相：空气95% + CO? 5%  

传代比例  1:2至1:3（胰酶消化时间1-2分钟）

冻存条件  90%完全培养基 + 10% DMSO，液氮储存

操作步骤

复苏

37℃水浴快速解冻冻存管，加入5 mL完全培养基混匀，离心（1000 RPM，5分钟）后重悬接种至T25瓶。

关键点：次日换液去除死细胞，连续观察2-3天。

传代

PBS清洗后，加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-2分钟（显微镜下观察细胞变圆脱落），加完全培养基终止消化。

注意事项：

消化时间需严格控制（过度消化损伤细胞）；

吹打均匀避免细胞团块。

冻存

汇合度80%时消化，离心后用冻存液重悬，程序降温（-1℃/min）至-80℃后转入液氮。

三、关键注意事项

污染防控

定期检测支原体（推荐PCR法），避免真菌污染（培养基中可添加两性霉素B）。

培养细节

贴壁问题：若运输后细胞脱落，可离心收集（1000 RPM，5分钟）后重新接种。

血清浓度：初始培养可提高至15% FBS促进贴壁，稳定后恢复10%。

实验应用

染色体分析：秋水仙素处理（0.1 μg/mL，4小时）后制备染色体标本。

病毒接种：细胞汇合度90%时接种病毒，37℃培养可提高病毒复制效率。

四、常见问题与解决方案

问题  原因  解决方案

细胞消化过度  胰酶作用时间过长  缩短至1分钟内，及时终止消化

生长缓慢  血清质量或密度过高  更换优质FBS，密度控制在5×10? cells/mL

细胞老化  传代次数过多（＞20代）  早期冻存主细胞库，避免长期传代

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注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。