自产动物ELISZK-快速检测试剂盒

自产动物ELISZK-快速检测试剂盒

【测定原理】

自产动物ELISZK-快速检测试剂盒    本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物类药物的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物类药物的含量。

【试剂盒技术指标】   

 规      格：96孔敏 度： 0.1ppb

/盒

灵 检测时间：45min

样本检测下限：

组织样本（鸡、鸭、猪肉/肝、虾、鱼、鸡蛋）：

牛奶、蜂蜜样本：

 样本回收率：

组     织   …………………………………… 85%±20%

牛奶、蜂蜜  ………………………………  80%±20%

【试剂盒组成】

1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔）

2、 标准品溶液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb

3、 高浓度标准品：×1瓶：（1ml/瓶）100ppb

4、 酶标记物       7ml………………………红色帽

5、 抗体工作液   7ml ………………………绿色帽

6、 底物A液      7ml ………………………棕色帽

7、 底物B液     7ml  ……………………黑色帽

8、 终  止  液     7ml  ……………………黄色帽

9、 20X浓缩洗涤液40 ml  ………………白色帽

10、 2X 浓缩复溶液   50ml ·………………蓝色帽 

【 所用仪器、试剂】

具备的仪器：酶标仪、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮 吹仪、刻度移液管

微量移液器：单道 20μl～200μl、单道100μl～1000μl多道 30～300 μl

试           剂： 甲醇、正己烷、Na₂HPO₄·12H₂O、NaCl、NaH₂PO₄·2H₂O

【实验前溶液配制】

配液1、20mM PBS缓冲液

       5.16g Na2HPO4*12H2O；0.87gNaH2PO4*2H2O;8.5gNaCl；

       加入蒸馏水至1000ml；用于样品提取液的配制。

配液2、样品提取液的配制

        取1ml甲醇与9ml的20mM PBS缓冲液混匀。

配液3、 将2X浓缩复溶液用去离子水按1：1稀释。(1份浓缩复溶掖+1份去离子水，用于抗体的稀释和样本提取后的复溶)。

配液4、将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水按照 1：19稀

释（1份浓缩洗涤液+19份去离子水），或按 所需用量配制洗涤液

【样本前处理步骤】

u 样本处理前须知

（a）实验中必须使用一次性吸头，吸取不同试剂时要更换吸头。

（b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。

u 样本处理：

（a）组织样本前处理方法（不用过柱）

1、 称取1±0.05g 均质后的样本于离心管中，加入4ml样品提取

       液，振荡5min，室温4000r/min 以上，离心10min；

2、 取1ml上清液收集于另一试管中;加入1ml 正己烷,振荡1min，

    室温4000r/min 以上，离心10min；

3、 取50 µl下层液体于另一容器中，加入200μl稀释液混合30s；

4、 取50 μl 用于分析

    样本稀释倍数: 20 倍

（b）蜂蜜处理方法

1、 准确称取1±0.05g 蜂蜜样本于离心管中，加入4ml 样品提 取

        液，强烈混合振荡5min，室温 4000r/min以上，离心10min；

2、 取出50μl 上清液于另一试管中，加入450μl稀释混合30s；

3、 取50 μl 用于分析

样本稀释倍数: 40 倍

（c）牛奶样品处理方法

脱脂牛奶

1、取出50μl 脱脂牛奶与1950μl稀释液，混30s；

2、取50 μl 用于分析

脂肪奶

3、吸取1ml 牛奶样本于离心管中；于15℃环境3000r/min，离心

   10min；（如果没有冷冻离心机请预先冷却后再离心)

4、取出50μl 牛奶于与1950μl稀释液，混合30s；

5、取50 μl 用于分析

   样本稀释倍数: 40 倍

【 酶标免疫分析程序】

u 操作步骤：

1、 将所需试剂从冷藏环境中取出，置室温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、 按板架及需要取出微孔条，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。

3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

4、 加标准品/样本50µl /孔，然后加酶标记物50μl/孔，再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，25℃环境反应30min。

5、 取出用洗涤液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

6、 显色：每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl，轻轻振荡混匀，25℃环境避光显色15min。

7、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测在5min内读完数据），测定吸光度值（OD值）。

【结果判定】

 结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法 产品只用于科研。