斑马鱼细胞；ZF4

产品信息：

来源与背景

建立于1995年，源自斑马鱼（Danio rerio）1日龄胚胎，由荷兰皇家科学院Hubrecht研究所开发。

形态：成纤维细胞样，贴壁生长，胞质透明，核圆且居中。

种属特异性：作为模式生物细胞系，基因组与人类高度同源（约70%基因保守）。

生物学特性

温度敏感性：最适生长温度为 28℃（冷水鱼类细胞特性），超过30℃细胞活力显著下降。

病毒敏感性：对鱼类病毒（如SVCV、VHSV）及部分哺乳动物病毒（如寨卡病毒）敏感，常用于抗病毒药物筛选。

荧光标记变体：存在红色荧光蛋白（RFP）标记株系（ZF4/RFP），用于活细胞示踪。

二、培养操作流程

培养基与试剂

成分  要求  备注

基础培养基  DMEM:F12（1:1）  含2mM L-谷氨酰胺

血清添加  10%胎牛血清（FBS）  需批次筛选（推荐Gibco 10270）

双抗  1%青霉素-链霉素  可选（病毒实验时建议添加）

冻存液  90%完全培养基 + 10% DMSO  程序降温（-80℃过夜→液氮）

传代培养（贴壁细胞）

消化：弃旧培养液，PBS润洗后加入0.25%胰酶-0.53 mM EDTA（T25瓶用1 mL），28℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆即终止。

终止与重悬：加入完全培养基终止消化，轻柔吹打制成单细胞悬液（避免气泡损伤）。

离心与接种：1000 rpm离心5分钟，弃上清，用新鲜培养基重悬后按 1:2至1:4比例 传代（T25瓶补液6-8 mL）。

冻存与复苏

复苏：28℃水浴快速解冻，离心（1000 rpm，5分钟）后重悬接种。

注意事项：贴壁不牢的细胞需离心收集，胰酶短时消化（20秒）后重悬铺板。

三、特殊注意事项

温度控制

严格维持28℃：温度波动＞2℃会导致细胞代谢异常，需专用低温培养箱。

运输与验收

采用干冰运输，收到后立即用75%酒精消毒瓶身，28℃培养箱静置3-4小时稳定状态，拍照记录细胞形态（40×, 100×, 200×）作为售后依据。

支原体检测

每月定期检测（PCR法），避免支原体污染影响实验结果。

科研应用：

毒理学：水生污染物（重金属、农药）的细胞毒性评估（如LC50测定）。

病毒学：鱼类病毒（SVCV）复制周期及宿主互作机制研究。

发育生物学：胚胎发育相关基因（如sox9b）的功能分析。

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细胞类型与特性

原代细胞：直接从组织中分离的细胞，通常指第1-10代细胞，具有接近体内状态的特性。

细胞系：原代细胞首次传代成功后形成的细胞群，可连续传代。

细胞株：从原代培养或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞，通常为第10-50代。

根据生长方式分为：

贴壁细胞：需附着在培养瓶表面生长，如成纤维细胞、上皮细胞。

悬浮细胞：在培养基中自由悬浮生长，如血液细胞。

半贴壁半悬浮细胞：兼具贴壁和悬浮生长特性。