登革病毒Ⅱ型检测试剂盒

登革病毒Ⅱ型检测试剂盒

试剂简介：

登革病毒Ⅱ型检测试剂盒是一种用于检测登革病毒Ⅱ型核酸的分子诊断工具，通常采用实时荧光定量PCR技术，具有高灵敏度、高特异性和快速检测的特点。

技术原理与核心参数

技术原理：

该试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光PCR技术，针对登革病毒Ⅱ型的保守基因序列设计特异性引物和荧光探针，通过体外扩增检测病毒核酸。

探针的5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如TAMRA），在PCR扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性将探针降解，释放荧光信号

，通过实时监测荧光强度变化来检测病毒核酸。

产品特点

高灵敏度：可检测低病毒载量样本，灵敏度优于传统方法。

高特异性：引物和探针针对DENV-2保守区设计，避免与其他病毒交叉反应。

快速高效：整个检测过程约1.5-2小时，适合快速诊断。

自动化兼容：适配主流荧光定量PCR仪，支持高通量检测。

操作流程

实验分区要求：

试剂准备区

样本处理区

扩增及产物分析区

具体步骤：

样本采集与处理：

采集疑似感染病人的静脉血2mL至EDTA抗凝管。

离心分离血清或血浆，提取病毒RNA，操作需在冰上进行以避免核酸降解。

试剂准备：

从-20℃取出试剂盒，融化并混匀组分。

配制PCR反应液：按比例混合缓冲液、dNTPs、引物、探针和逆转录酶/聚合酶。

加样与扩增：

在PCR反应管中加入处理好的样本RNA或对照品（5μL/管），终体积25μL。

设置PCR程序：50℃反转录30分钟；95℃预变性15分钟，然后45个循环（94℃ 15秒，58℃ 45秒），实时采集FAM通道荧光信号。

结果分析：

通过Ct值（循环阈值）判断样本是否为阳性，Ct值越小表示病毒载量越高。

阳性对照应出现典型扩增曲线，阴性对照应无扩增或Ct值大于。

注意事项

分区操作：严格在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区独立操作，避免交叉污染。

质量控制：每批检测需设阳性/阴性对照；核酸提取质量需通过分光光度计检测确认。

安全处理：废弃物需灭菌后丢弃，避免开盖防止气溶胶污染。

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