登革病毒Ⅲ型 / 登革病毒Ⅳ型检测试剂盒( 双重荧光 PCR 法 )

登革病毒Ⅲ型 / 登革病毒Ⅳ型检测试剂盒( 双重荧光 PCR 法 )

试剂简介：

登革病毒Ⅲ型/登革病毒Ⅳ型检测试剂盒(双重荧光PCR法)是一种用于同时检测登革病毒Ⅲ型和Ⅳ型的分子诊断工具，采用双重荧光PCR技术，具有高特异性、高灵敏度和操作简便的特点。

技术原理

检测原理：基于双重TaqMan探针实时荧光定量PCR技术，针对登革病毒Ⅲ型和Ⅳ型基因组中高度保守的区域设计特异性引物和荧光探针。

在PCR扩增过程中，两种病毒的核酸分别与对应的探针结合，释放不同荧光信号（如FAM通道用于登革病毒Ⅲ型，VIC通道用于登革病毒Ⅳ型），

通过实时监测荧光强度变化实现病毒核酸的定性和/或定量检测。

产品规格与性能参数

包装规格：常见为48T/盒或50T/盒，包含反应液、酶液、阳性质控品、阴性质控品等组分。

检测范围：通常为2×103～1×10? copies/mL。

最低检测限：可达1×103 copies/mL，部分试剂盒灵敏度更高。

保存条件：-20℃避光保存，有效期一般为12个月。

操作流程与特点

操作分区要求：实验需严格分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增及产物分析区），避免交叉污染。

具体操作步骤：

样本采集与处理：采集疑似感染患者的静脉血、血清或血浆样本，使用配套核酸提取试剂盒提取RNA模板。

试剂配制：在冰盒中操作，按说明书配制PCR反应体系，加入反应液、酶液、引物、探针和模板核酸。

PCR扩增：设置荧光定量PCR仪参数（如预变性：50℃ 15分钟、95℃ 15分钟；循环：94℃ 15秒→55℃ 45秒，40-45个循环），选择FAM和VIC等荧光通道进行检测。

结果分析：根据Ct值和扩增曲线判定结果（Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性，35＜Ct＜40需复检），同时确保质控品结果符合要求。

操作特点：

高灵敏度：可检测低病毒载量样本，适用于早期诊断。

高特异性：避免与其他血清型登革病毒交叉反应。

快速高效：全程检测时间1.5-2小时，远快于传统病毒培养方法。

自动化兼容：适配主流PCR仪，支持高通量检测。

注意事项与质量控制

防污染措施：实验分区物理隔离，使用一次性吸头和专用工具，反应液避光保存，禁止开盖防止气溶胶污染。

质量控制：每次检测需设置阴性对照（无特异性扩增曲线）和阳性对照（Ct值≤35），确保结果有效性。

应用领域与局限性

应用领域：主要用于登革热流行地区的临床诊断、疫情监测和科研实验，也可用于献血者筛查和疾病防控。

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