转氢酶-1测定试剂盒/分光光度法/48样 新品

转氢酶-1测定试剂盒/分光光度法/48样

测定意义：

TH 位于线粒体的内膜上，又称为呼吸电子传递链复合体六，催化 NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互转化。催化正向反应称为 TH-1。线粒体 NADH 含量增加时会导致线粒体膜的 H+电化学梯度升高，因而促进了电子传递链上 ROS 的产生。TH-1 促进 NADH 转换为 NADPH，从而提高线粒体的抗氧化能力。

测定原理：

NADH 和 NADPH 均在 340nm 有特征吸收，因此 TH 催化的转氢反应不能导致 340nm 吸光度发生变化。用人工合成底物 3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP+ ）替代 NADP+ ，TH-1 催化 APADP+还原生成的 APADPH 在 375nm 有特征光吸收，因此通过测定 375nm 光吸收增加速率，来计算 TH-1 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 375nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

(1)工作液的配制：临用前取试剂三、试剂四和试剂五各一支，将试剂四、五转移到试剂三中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

(2)在 1mL 玻璃比色皿中加入 100μL 样本和 1000 μL 工作液，混匀，立即记录 375nm 处初始吸光值 A1和 10min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。