非洲猪瘟病毒（ASFV）检测试剂盒（带内参，PCR-荧光探针法） 新品

商品属性：

非洲猪瘟病毒（ASFV）检测试剂盒（带内参，PCR-荧光探针法）是一种用于检测非洲猪瘟病毒核酸的分子诊断工具，其核心特点是通过内参系统监控样本质量和检测过程的可靠性。以下是详解说明及操作特点：

检测原理与组成：

基于实时荧光PCR技术，采用双重检测系统：

FAM通道：特异性检测ASFV P72基因保守区域（覆盖所有基因型）。

HEX通道：猪内参基因（如β-actin）监控样本质量，避免假阴性。

试剂盒组成：包含PCR反应液、引物/探针、阳性对照、阴性对照、内参模板等，规格通常为48T/盒。

操作流程：

模板制备：

样品处理：血液、组织（脾脏、淋巴结等）或环境样本，提取核酸后作为模板。

样品保存：2–8℃保存不超过24小时；长期保存需置于-80℃，避免反复冻融（冻融不超过3次）。

添加模板：

在冰盒上操作，向PCR反应管中加入模板（顺序：阴性对照、待测样品、阳性对照），盖好管盖后混匀离心。

扩增反应：

使用荧光定量PCR仪，设置荧光基团FAM（ASFV检测）和HEX（内参检测），淬灭基团TAMRA。

扩增程序：95℃预变性，随后40–45个循环（95℃变性、60℃退火延伸），在60℃收集荧光信号。

结果判定：

内参有效性：HEX通道检测猪内参基因，若无扩增曲线或Ct≥40，提示样本抑制或提取失败，需重测。

ASFV检测：

Ct≤36且呈“S”型扩增曲线：报告阳性。

36<Ct≤40：需重复实验确认；若Ct仍≤40且扩增曲线明显，报告阳性。

无Ct值或Ct=40：报告阴性。

质控要求：阴性对照无扩增，阳性对照Ct≤35，否则实验无效。

操作特点与注意事项：

高灵敏度与特异性：最低检测限1×103 copies/mL，覆盖所有ASFV基因型，无交叉反应。

防污染设计：需分区操作（样本制备区、扩增区），使用无核酸酶耗材，避免开盖造成气溶胶污染。

快速高效：1.5–2小时出结果，兼容自动化PCR仪，适合高通量检测。

保存与有效期：-20℃避光保存，有效期1年；不同批号试剂勿混合使用。

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