非洲猪瘟病毒荧光PCR反应液

商品属性：

非洲猪瘟病毒荧光PCR反应液是试剂盒的核心组分，基于TaqMan探针法或SYBR Green法开发，包含优化的预混酶、引物探针及反应缓冲体系，用于高灵敏、高特异检测ASFV核酸。

详解说明

组成与储存：

反应液含引物、探针、Taq酶、dNTPs等，避光保存于-20℃，避免反复冻融（有效期12个月）。使用前需室温融化、充分混匀并瞬时离心。

检测原理：

采用TaqMan探针法（靶向VP72基因保守区域）或SYBR Green染料法，通过荧光信号实时监测扩增过程。TaqMan法特异性更高，可避免交叉反应；SYBR Green法操作简便，但需注意非特异扩增。

性能参数：

灵敏度：最低检测限达100–500 copies/mL，显著高于传统方法。

特异性：≥99%，不与其他链球菌交叉反应。

操作特点

操作流程：

反应体系配制：

按说明书混合反应液（如20–25 μL体系：反应液14–18 μL + 酶0.25–1 μL）。

加样顺序：阴性对照→样本→阳性对照，避免交叉污染。

PCR扩增程序：

常见参数：95℃预变性2–5 min；40–45循环（95℃变性10–15 sec → 58–60℃延伸20–60 sec），60℃收集FAM荧光信号。

结果判定：

质控标准：阳性对照Ct≤30–35且有扩增曲线；阴性对照无Ct值或Ct≥。

样本判定：Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性；35–40间需复检7。

优势与注意事项：

优势：一管式闭管操作，降低污染风险；支持批量自动化，适合大规模筛查（全程1–2小时）2。

关键注意事项：

分区操作（试剂准备、样本处理、PCR扩增），专用耗材防交叉污染3。

反应液避光，加样避免气泡；扩增后PCR管密封丢弃，防气溶胶污染。

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