非洲猪瘟阳性对照

非洲猪瘟阳性对照

试剂简介：

非洲猪瘟阳性对照是实验室检测中用于验证检测系统有效性的关键试剂，通常采用含非洲猪瘟病毒特异性基因片段（如VP72基因）的质粒或灭活病毒样本。其核心作用是确保每次检测的准确性与可靠性，避免假阴性或假阳性结果。

阳性对照的构成与制备

基因片段来源：阳性对照多通过人工合成非洲猪瘟病毒VP72基因片段，连接至质粒载体（如pMD20-T-VP72），再稀释至特定浓度（如10,000 copies/μL）后保存于-20℃备用。部分产品直接使用灭活的非洲猪瘟病毒样本作为阳性对照。

配套试剂盒：商业化检测试剂盒（如荧光PCR试剂盒）通常包含阳性对照，与阴性对照、引物、探针等共同组成检测体系。

操作特点与流程

使用场景：

在每次检测中，需同时设置阳性对照、阴性对照与待检样本，以监控检测过程的准确性。

阳性对照需与待检样本经历相同的核酸提取、扩增和检测流程。

结果判定标准：

荧光PCR法：若阳性对照的扩增曲线呈“S”形且Ct值≤阈值（如38），则判定为有效；若未出现扩增或Ct值异常，需排查试剂或操作问题。

电泳法：阳性对照应出现特异性条带（如257bp），若未出现则本次检测结果无效。

操作注意事项：

防污染：阳性对照需单独处理，避免与样本交叉污染；操作时使用带滤芯枪头，穿戴防护装备。

保存要求：避免反复冻融，长期保存需置于-80℃；短期保存（24小时内）可置于2-8℃。

时效性：加样后需在规定时间内判读结果（如10-20分钟内），超时可能导致假阳性。

与其他检测环节的协同

阳性对照需与临床症状观察（如体温、皮肤出血点）、样本类型（血液或口鼻拭子）结合使用，提升检测可靠性。

若阳性对照异常（如未检出），需重新检测并排查试剂失效、操作失误或样本抑制等因素

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