人胚肾细胞；HEK-293T悬浮 新品

产品信息：

人胚肾细胞HEK-293T悬浮是一种常用的细胞系，以下是其详细说明、培养操作和特性：

细胞来源与特性   源自人胚胎肾组织，上皮细胞样形态，贴壁或悬浮生长，表达SV40大T抗原，高转染效率，常用于基因表达和病毒包装研究

培养基   DMEM培养基+10%胎牛血清（FBS）+1%双抗（P/S）

培养条件   37℃、5% CO、70%-80%湿度环境

传代方法   细胞密度达70%-80%时传代，用胰酶消化，按1:2至1:4比例分瓶

冻存与复苏   冻存用90%血清+10% DMSO，液氮保存；复苏时37℃水浴快速解冻，离心后重悬接种

应用   用于基因表达研究、蛋白质生产、病毒包装及转染实验

培养操作步骤

复苏细胞：

从液氮中取出冻存管，迅速投入37℃水浴中快速解冻。

将细胞悬液转移至含5-6mL完全培养基的离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液。

用新鲜培养基重悬细胞，接种到预热的培养瓶中，37℃、5% CO培养箱中培养过夜。

细胞传代（密度达70%-80%时进行）：

弃去旧培养基，用PBS润洗细胞1-2次。

加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变圆脱落。

加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打使细胞悬浮。

1000rpm离心5分钟，弃去上清液，用新鲜培养基重悬细胞，按1:2至1:4的比例分装到新的培养瓶中，补加新鲜培养基，继续培养。

细胞冻存：

选择生长状态良好的细胞，收集细胞悬液，1000rpm离心5分钟，弃去上清液。

用无血清冻存液重悬细胞，分装至冻存管中，逐步降温后存于液氮罐或-80℃冰箱。

注意事项

无菌操作：整个培养过程需在无菌条件下进行，避免污染。

细胞观察：定期在显微镜下观察细胞形态和密度，及时换液和传代。

培养基更换：每隔2-3天更换一次培养基，以维持细胞的健康状态。

安全防护：操作时需佩戴防护装备，如手套、口罩和护目镜，避免接触有害物质。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

功能特点

通过被动运输和主动运输实现物质跨膜转运；以ATP为核心载体，通过线粒体氧化磷酸化或叶绿体光合磷酸化途径供能；通过受体-第二信使-效应器的级联反应模式进行信号转导；原核细胞采用二分裂，真核细胞则通过有丝分裂、减数分裂等方式繁殖；细胞可进行程序性死亡（凋亡），并在多细胞生物中实现分化形成不同组织

注意事项与应用

无菌操作：必须严格无菌无毒，避免微生物污染和不同细胞间交叉污染。

营养需求：需提供氨基酸、维生素、无机盐、促生长因子等，动物细胞还需血清。

抗生素使用：可添加双抗或三抗预防污染，但长期培养不建议持续使用，以防产生耐药性。

细胞培养技术是生物医学研究的基础工具，可用于细胞生理代谢、药物筛选、疫苗生产等研究。不同细胞系的具体培养条件需参考相关文献或实验经验调整。

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